Question

【题目】人乳头状瘤病毒（HPV）与宫颈癌的发生密切相关，抗HPV的单克隆抗体可以准确检测出HPV，从而及时监控宫颈癌的发生，以下是以HPV衣壳蛋白为抗原制备出单克隆抗体的过程，请据图回答下列问题：

（1）单克隆抗体制各过程中涉及的细胞工程技术有____________________，单克隆抗体最广泛的用途是用作体外诊断试剂，在诊断的应用上具有__________________的优点。

（2）设法将B淋巴细胞和小鼠骨髓瘤细胞融合，常用的生物诱导因素是__________；杂交瘤细胞中染色体数目与普通淋巴细胞相比具有的特点是____________________。

（3）杂交瘤细胞还需进行克隆化培养和抗体检测，对于抗体检测呈_________性的杂交瘤细胞应进行克隆化，克隆化的方法最常用的是有限稀释法，即稀释细胞到3~10个/mL,每孔加入细胞稀释液________mL（填“0．1”“1”或“10”），使每个孔内不多于一个细胞，达到单克隆培养的目的。

（4）由上述过程生产出的单克隆抗体不能直接用于人体，理由是_______________________。

（5）科学家从某些无限增殖细胞的细胞质中分离出了无限增殖调控基因（prG），该基因能激发动物细胞分裂，这为单克隆抗体的制备提供了更多的思路。除本题描述的一种制备单克隆抗体技术外，请再简要写出一种制备单克隆抗体的思路：_________________________。

Answer 1

【答案】动物细胞培养、动物细胞融合 准确、高效、简易、快速 灭活病毒 染色体数目加倍 阳 0.1 小鼠形成的抗体对人体来说是抗原，存在着排异反应 通过基因工程向浆细胞中导入prG（或：利用核移植技术将浆细胞的细胞核移植到去核的无限增殖细胞中）

【解析】

单克隆抗体制备流程：

（1）对小鼠注射特定的抗原蛋白，使小鼠产生免疫反应；（2）得到相应的B淋巴细胞；（3）将小鼠骨髓瘤细胞与B淋巴细胞融合，再用特定的选择培养基进行筛选；（4）在该培养基上，未融合的亲本细胞和融合的具有同种核的细胞都会死亡，只有融合的杂种细胞才能生长（这种杂种细胞的特点是既能迅速大量繁殖又能产生专一的抗体）（5）对上述杂交瘤细胞还需进行克隆化培养和抗体检测，经多次筛选，就可获得足量的能分泌所需抗体的细胞；（6）最后，将杂交瘤细胞在体外条件下做大规模培养，或注射到小鼠腹腔内增殖，这样，从细胞培养液或小鼠腹水中，就可以提取出大量的单克隆抗体。

（1）单克隆抗体制备过程中涉及的细胞工程技术有动物细胞培养、动物细胞融合。单克隆抗体最广泛的用途是用作诊断试剂，具有准确、高效、简易、快速等优点。

（2）细胞融合的诱导的因素有化学因素，如聚乙二醇；生物因素，如灭活病毒，物理因素，如电激。因为杂交瘤细胞含有双亲的遗传物质，故杂交瘤细胞中染色体数目与普通淋巴细胞相比具有的特点是染色体数目加倍。

（3）对于抗体检测呈阳性的杂交克隆应尽早进行克隆化，克隆化的方法最常用的是有限稀释法，即稀释细胞到3～10个细胞/mL，每孔加入细胞稀释液0.1mL，使每个孔内不多于一个细胞，达到单克隆培养的目的。

（4）因为小鼠形成的抗体对人体来说是抗原，存在着排异反应，故上述过程生产出的单克隆抗体不能直接用于人体。

（5）可以利用基因工程技术将无限增殖调控基因（prG）分离出来再导入到浆细胞中，或者利用细胞核移植技术将浆细胞的细胞核移入到含有prG基因的细胞质中，获得重组细胞，最终获得单克隆抗体。