Question

1．在生物的生长发育过程中，基因是选择性表达的．某真核生物，要想获得极为稀少的mRNA及其克隆，可以用如图所示的差异杂交法．Poly（A）是指位于mRNA上的150-200个腺苷酸残基．请回答下列问题．
（1）利用表达目的mRNA的细胞获得放射性标志的探针时，需要用逆转录酶酶，可以用Poly（A）作为引物．
（2）用羟基磷灰石柱层析法，回收未杂交的³²P标记的单链DNA（填“未杂交的³²P标记的单链DNA”或“杂交分子”），用构建cDNA（填“基因组”或“cDNA”）文库．
（3）在生物的生长发育过程中．由于基因选择性表达导致细胞分化，该过程的结果使多细胞生物体中的细胞趋向专门化，有利于提高各种生理功能的效率．
（4）若用NaOH水解除去mRNA获得的分子与不表达目的mRNA细胞中获得的单链DNA杂交，可能形成杂合双链区和游离的单链区，原因是DNA分子中含有内含子、非编码区等序列，mRNA分子中没有互补的碱基序列，仍然为两条游离的单链，所以出现游离单链区．DNA分子中含有外显子序列，mRNA中具有互补的碱基序列，互补碱基序列就会结合在一起，形成杂合双链区．

Answer 1

分析 分析图解可知，图中a表示转录形成mRNA，b表示逆转录形成DNA单链，c过程表示去除Poly（A），剩余的DNA片段作为探针，并和不表达目的mRNA的细胞中表达的基因中的mRNA杂交，从而获得表达的基因的单链DNA．

解答 解：（1）分析图解可知，利用表达目的mRNA的细胞获得放射性标志的探针的过程就是逆转录过程，因此需要用逆转录酶，用Poly（A）作为引物．
（2）根据题意可知“要想获得极为稀少的mRNA及其克隆”，因此用羟基磷灰石柱层析法，回收未杂交的³²P标记的单链DNA，由于该DNA是利用mRNA逆转录而来，不包含这种生物的全部基因，因此构建的是cDNA文库．
（3）在生物的生长发育过程中，由于基因选择性表达导致细胞分化，该过程的结果使多细胞生物体中的细胞趋向专门化，有利于提高各种生理功能的效率．
（4）DNA分子中含有内含子、非编码区等序列，mRNA分子中没有互补的碱基序列，仍然为两条游离的单链，所以出现游离单链区．DNA分子中含有外显子序列，mRNA中具有互补的碱基序列，互补碱基序列就会结合在一起，形成杂合双链区，因此用NaOH水解除去mRNA获得的分子与不表达目的mRNA细胞中获得的单链DNA杂交，可能形成杂合双链区和游离的单链区．
故答案为：
（1）逆转录酶    Poly （A）    
（2）未杂交的³²P标记的单链DNA     cDNA
（3）分化    专门化
（4）DNA分子中含有内含子、非编码区等序列，mRNA分子中没有互补的碱基序列，仍然为两条游离的单链，所以出现游离单链区．DNA分子中含有外显子序列，mRNA中具有互补的碱基序列，互补碱基序列就会结合在一起，形成杂合双链区

点评 本题属于信息题，考查了遗传信息的表达和基因文库构建的有关知识，要求考生能够通过图示分析理解部分基因文库获得的原理，能够区分通过反转录法合成的目的基因和细胞中原有基因的区别，区分基因组文库和部分基因文库，再结合题干信息答题，具有一定的难度．