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【题目】(一)请回答利用枯草杆菌生产α-淀粉酶及酶固定化实验的有关问题:

(1)筛选高表达菌株的最简便方法之一是:___________。 一般通过_______两种手段实现。筛选出的菌株在发酵生产之前还需利用_________培养基进行扩大培养。

(2)利用物理或化学的方法将 α-淀粉酶固定在_______的介质上成为固定化酶。

(3)实验过程中涉及两次蒸馏水洗涤反应柱的操作, 所用的蒸馏水体积为装填体积的________,第二次洗涤的目的是除去________

(4)从反应柱下端接取少量流出液进行 KI-I2 颜色测试,结果未呈现红色。下列有关此现象 的解释错误的是:________

A.反应柱中没有α-淀粉酶被固定

B.流速过快淀粉未被水解

C.接取的流出液是蒸馏水

D.流速过慢淀粉被水解成葡萄糖

(二)毛角蛋白Ⅱ型中间丝(KIF-Ⅱ)基因与绒山羊的羊绒质量密切相关。获得转 KIF-Ⅱ 基因的高绒质绒山羊的简单流程如图:

(1)转基因过程用到的工具酶有______________

(2)在过程②中,用_______处理将皮肤租住分散成单个成纤维细胞。由于人们对动 物细胞所需营养物质还没有完全搞清楚,因此在培养细胞时需在培养基中加入一定量的_________,在培养过程中,应将培养瓶置于________中培养。

(3)若要获得多只相同的转基因山羊, 可对图中早期胚胎进行______后进行胚胎移植。

(4)下列有关基因工程的叙述,正确的是_______________

A.切割目的基因和载体DNA 时为获得相同的粘性末端,必须用相同的核酸内切酶

B.基因工程的原理是基因重组,其核心是上图中的过程④

C.图示过程获得的转基因绒山羊并不是克隆动物

D.重组表达载体上含有 RNA 聚合酶的识别位点

【答案】 单菌落分离 划线分离和(稀释)涂布分离 液体 非水溶性 10倍 残留的淀粉溶液 D 限制性核酸内切酶 DNA连接酶 胰蛋白酶 动物血清 CO2培养箱 胚胎分割 D

【解析】试题分析:根据题意和图示分析可知:图示表示获得转KIFⅡ基因的高绒质绒山羊的简单流程图,其中①表示基因表达载体的构建过程,该过程需要限制酶和DNA连接酶;②表示动物细胞培养过程,该过程需要采用胰蛋白酶处理组织块以获得单个细胞;③表示卵母细胞的采集和培养过程;④表示核移植过程

(一)(1)筛选高表达菌株的最简便方法之一是单菌落分离,一般通过划线分离和(稀释)涂布分离液体两种手段实现,筛选出的菌株在发酵生产之前还需利用培养基进行扩大培养。

(2)固定化酶就是利用物理或化学的方法将α‐淀粉酶固定在非水溶性的介质上。

(3)实验过程涉及两次蒸馏水洗涤反应柱的操作,所用的蒸馏水体积为装填体积的10倍,第二次洗涤的目的是除去残留的淀粉溶液。

(4)反应柱中没有α-淀粉酶被固定,则淀粉不会被水解,导致KI-I2 颜色测试,结果未呈现红色,A正确;流速过快淀粉未被水解,会导致结果未呈现红色,B正确;接取的流出液是蒸馏水,则结果未呈现红色,C正确;淀粉溶液经过α‐淀粉酶后的水解产物是糊精,不是葡萄糖,D错误。

(二)(1)转基因过程中,获取外源基因需要用限制性核酸内切酶对含有该基因的DNA片段进行切割,再利用DNA连接酶将目的基因了解到运载体上形成重组DNA。

(2)②表示动物细胞培养过程,该过程中常用胰蛋白(或胶原蛋白)酶处理将皮肤组织块分散成单个成纤维细胞。在培养细胞时需在培养基中加入一定量的动物血清,以补充合成培养基不含有的成分;在培养过程中应将培养瓶置于CO2培养箱培养,以维持PH的稳定。

(3)要获得多只相同的转基因山羊,可对图中早期胚胎进行胚胎分割后进行胚胎移植。

(4)不同的限制酶也可以露出相同的黏性末端,A错误;过程①表示构建基因表达载体,是基因工程的核心步骤,B错误;图示过程获得的转基因绒山羊是克隆动物,C错误;重组表达载体上含有 RNA 聚合酶的识别位点,可以催化转录的进行,D正确。

练习册系列答案
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