Question

［生物-现代生物科技专题］必答题（10分）

Rag₂基因缺失小鼠不能产生成熟的淋巴细胞。科研人员利用胚胎干细胞（ES细胞）对Rag₂基因缺失小鼠进行基因治疗。其技术流程如图：

（1）步骤①中，在核移植前应去除卵母细胞的_______________________。

（2）步骤②中，重组胚胎培养到_______________________期时，可从其内细胞团分离出ES细胞。

（3）步骤③中，需要构建含有基因Rag₂的表达载体。可以根据Rag₂基因的_______________________设计引物，利用PCR技术扩增Rag₂基因片段。用HindⅢ和PsⅠ限制酶分别在片段两侧进行酶切获得Rag₂基因片段。为将该片段直接连接到表达载体，所选择的表达载体上应具有_______________________酶的酶切位点。

（4）为检测Rag₂基因的表达情况，可提取治疗后小鼠骨髓细胞的_______________________，用抗Rag₂蛋白的抗体进行杂交实验。

Answer 1

【答案】（10分）

（1）细胞核

（2）囊胚

（3）核苷酸序列    HindⅢ和PstⅠ

（4）蛋白质

【解析】（1）步骤①是核移植过程。体细胞核移植前要除去受体卵母细胞的细胞核，原因是若不去掉卵母细胞的细胞核，就会造成细胞里面就有两个细胞核，使得遗传物质是不稳定的。

（2）ES细胞是由早期胚胎（囊胚）的内细胞团分离出来的一类细胞。

（3）步骤③过程是导入目的基因——Rag2基因于ES细胞中的基因表达载体的构建过程。在生物体外可通过PCR技术扩增目的基因，其条件是模板DNA、Rag2基因的核苷酸序列设计引物、四种脱氧核苷酸、热稳定DNA聚合酶等，另外根据题干可知，获得Rag2目的基因需要用 HindⅢ和PstⅠ两种限制酶，所以在构建表达载体时，所选择的表达载体上应具有HindⅢ和PstⅠ酶的酶切位点。

（4）检测目的基因是否翻译相应蛋白质时，应采用抗原—抗体杂交（免疫）法，即提取蛋白质，用相应的抗体进行抗体—抗原杂交，看是否有杂交带。