Question

【题目】橙子味酸甜，营养丰富。橙汁易贮运，是世界上最多人饮用的果汁之一。

回答下列问题：

（1）制作橙汁时常加入果胶酶，果胶酶能分解果胶来提高橙汁的___________（答出两点）。为回收溶液中的果胶酶一般采用___________法将酶固定（答出两种方法）。

（2）果园土壤中的脂环酸芽孢杆菌，需氧，耐热，生长温度35-80℃。橙汁生产过程中若感染此菌，会影响橙汁品质。为优化橙汁生产工艺，进行了下述研究。

[实验一：脂环酸芽孢杆菌的筛选和鉴定]

实验步骤：

a配制K氏培养基：

b取果园土壤，制备土壤稀释液：

c将土壤稀释液接种在K氏培养基平板上，培养后获得单菌落。

d对获得的目的菌落进行筛选和鉴定。

①K氏培养基的主要成分有酵母膏、蛋白胨和葡萄糖等，其中能提供生长因子的是___________。

②将上述步骤c初步分离得到的目的菌株制成菌悬液，于80℃水浴中热处理10min后，取0．1mL涂布接种到K氏培养基平板上，45℃培养48h。此操作的目的是___________。

A．用80℃水浴杀死杂菌和芽孢

B．用80℃水浴进一步筛选出耐热目的菌株

C．分离纯化目的菌株

D．给细菌补充新的营养物质

③用接种环将筛得的目的菌株插入到半固体K氏培养基中，如下左图。接种时为什么要靠近酒精灯火焰：___________。45℃培养4-5天后进行观察，能够判断是脂环酸芽孢杆菌生长的试管是___________。

[实验二：脂环酸芽孢杆菌控制方法的研究]

实验步骤：

a称取一定量的抑菌剂，配制成不同浓度的抑菌液。

b将实验一得到的菌株原液适当稀释得到菌株稀释液。

c分别取不同浓度的抑菌液加入到K氏培养液中，再分别加入菌株稀释液形成菌悬液

（各试管中加入的同一种液体均为等量）。培养一段时间后，将上述菌悬液分别接种到K氏平板培养基上。

①实验二中，对照组的设置应该是：_____________________________。

②为便于检测抑菌剂的抑菌效果，宜采用哪种接种方法?_ ___________，为什么? ______________。

Answer 1

【答案】出汁率和澄清度 化学结合法、物理吸附法 酵母膏、蛋白胨 B、C 酒精灯火焰的外焰上方区域是高温无菌区，接种时在酒精灯火焰附近进行，可以防止杂菌污染 D 等量的无菌水加入到K氏培养液中，再加入等量的菌株稀释液，培养相同时间后，将菌悬液接种到K氏平板培养基上 涂布法 因为通过计算涂布法培养得到的菌落，可以反映抑菌剂的抑菌效果

【解析】

分离纯化微生物常常采用的接种方法有两种：平板划线法和稀释涂布平板法，但前者只能分离纯化得到单菌落，后者不仅可以得到单菌落，还能用于活菌计数。根据题意分析，便于检测抑菌剂的抑菌效果，采用稀释涂布平板法的，可以反映抑菌剂的抑菌效果。

（1）制作橙汁时可以加入果胶酶以分解果胶，从而提高橙汁的出汁率和澄清度。由于果胶酶溶于水，不利于重复利用，适合采用化学结合法或物理吸附法将果胶酶固定在某种介质上，使之成为不溶于水而又有酶活性的制剂。

（2）实验一：

①培养基一般添加的有水、无机盐、碳源、氮源及生长因子，结合题意葡萄糖主要提供碳源，而酵母膏和蛋白胨还能提供生长因子。

②将分离得到的目的菌株制成菌悬液，于80℃水浴中热处理10min，再取0.1mL热处理后的菌液涂布接种到K氏培养基平板上，45℃培养48h，其中80℃水浴中热处理10min，能杀死部分微生物，但不能杀死芽孢和孢子，同时土壤中的脂环酸芽孢杆菌需氧，耐热，也能起到筛选目的菌的作用。故选BC。

③酒精灯火焰的外焰上方区域是高温无菌区，接种时在酒精灯火焰附近进行，可以防止杂菌污染。脂环酸芽孢杆菌需氧型微生物，故为了获得更多的氧气，其应生长在培养基的上层。即D正确，ABC错误。

实验二：

①为了对照抑菌剂的抑菌效果，应控制好无关变量，用等量的无菌水代替抑菌液，其余的试剂和实验条件都保持相同且适宜。
②为便于检测抑菌剂的抑菌效果，最好在培养基表面能直接反映出菌落数目的差异，故采用涂布法进行接种，因为通过计算涂布法培养得到的菌落，可以反映抑菌剂的抑菌效果。