Question

将动物致病菌的抗原基因导入马铃薯制成植物疫苗，饲喂转基因马铃薯可使动物获得免疫力．以下是与植物疫苗制备过程相关的图和表：

表1 引物对序列表

引物对A	P1   AACTGAAATGTAGCTATC P2   TTAAGTCCATTACTCTAG
引物对B	S1   GTCCGACTAGTGGCTGTG S2   AGCTGGCGTTTAGCCTCG

表2几种限制酶识别序列及切割位点

限制酶	AlU	EcoR	Pst	Sma
切割位点	AG↓CT TC↑GA	G↓AATTC CTTAA↑G	CTGCA↓G G↑ACGTC	CCC↓GGG GGG↑CCC

请根据以上图表回答下列问题．
（1）在采用常规PCR方法扩增目的基因的过程中，使用的DNA聚合酶不同于一般生物体内的DNA聚合酶，其最主要的特点是

 

．
（2）PCR过程中退火（复性）温度必须根据引物的碱基数量和种类来设定．表1为根据模板设计的两对引物序列，图2为引物对与模板结合示意图．请判断哪一对引物可采用较高的退火温度？

 

．
（3）图1步骤③所用的DNA连接酶对所连接的DNA两端碱基序列是否有专一性要求？

 

．
（4）为将外源基因转入马铃薯，图1步骤⑥转基因所用的细菌B通常为

 

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（5）对符合设计要求的重组质粒T进行酶切．假设所用的酶均可将识别位点完全切开，请根据图1中标示的酶切位点和表2所列的识别序列，对以下酶切结果作出判断．
①采用EcoRⅠ和PstⅠ酶切，得到

 

种DNA片断．
②采用EcoRⅠ和SmaⅠ酶切，得到

 

种DNA片断
（6）质粒能与目的基因能够拼接其原因是

 

．
人的干扰素基因在酵母菌体内合成了人的干扰素，说明了

 

．

Answer 1

考点：基因工程的原理及技术

专题：

分析：PCR技术是在体外对DNA进行扩增，所用的DNA聚合酶与体内DNA聚合酶不同，是耐高温的DNA聚合酶，过程为变性使DNA分子两条链鈖旋开来，复性是让引物与DNA解旋开来的单链互补配对，延伸是在DNA聚合酶的作用在引物引导下合成子代DNA分子．耐高温的DNA分子中通常含有G与C碱基比例大，因为它们之间形成三个氢键，而A与T之间只有两个氢键．

解答： 解：（1）PCR方法扩增目的基因的过程中，需要进行高温解链过程，因此使用的DNA聚合酶具有耐高温的特性．
（2）耐高温的DNA分子中通常含有G与C碱基比例大，因为它们之间形成三个氢键，因此稳定性强．引物B中含C与G的碱基对较多，可采用较高的退火温度．
（3）多种限制酶切割，形成不同的切割位点，所用的DNA连接酶对所连接的DNA两端碱基序列就没有专一性要求．
（4）植物基因工程中常用农杆菌做受体细胞．
（5）据图分析，用到了EcoR I酶和Alu I酶切割抗原DNA片段产生了X、Y两个片段，而用EcoR I酶和SmaI酶切割质粒产生了 M、N两个片段，且M、N片段间存在Pst I酶切点．因此再用EcoRⅠ和PstⅠ酶切割这两片段形成的重组质粒，由于保留了Pstl的切割位点，所以可以得到两种DNA分子．而用EcoRⅠ和SmaⅠ酶切重组质粒中，如图I-②过程只能产生一种DNA片断．
（6）质粒能与目的基因能够拼接其原因是它们具有共同的物质基础和结构基础，以及具有相同的黏性末端．人的干扰素基因在酵母菌体内合成了人的干扰素，说明了不同生物共用一套密码子．
故答案为：
（1）耐高温  
（2）引物对B  
（3）否  
（4）农杆菌  
（5）①2  ②1
（6）它们具有共同的物质基础和结构基础，以及具有相同的黏性末端    不同生物共用一套密码子

点评：本题具有一定的难度，考查了运用PCR方法扩增目的基因的有关知识，意在考查考生的图解识别能力，尤其是限制酶的作用是解答本题的难点和关键点；能够识记PCR技术中DNA聚合酶耐高温的特点；识记DNA分子中C-G碱基对稳定强；识记基因工程之所以能够成功的原因等．