Question

20．在盛产柿子的某地，生物小组开展柿子酒、柿子醋生产的相关活动．
（1）土壤中的酵母菌计数：
在秋季的柿子园中，落地的柿子流出果汁的周围土壤中有酵母菌大量生长繁殖．
①用灭过菌的小铁铲、信封取该处土样、并在火焰②旁称取10g土样，加入盛有90ml无菌水的锥形瓶中，充分摇匀．而后进行系列稀释操作；吸取锥形瓶中土壤液的上清液1ml，转移至盛有9ml无菌水的大试管中充分摇匀，依次等比稀释，获得稀释至10¹、10²、10³、10⁴倍的土壤液的稀释液．
②为测定土壤中酵母菌的数量，选用第①步中所获得的10²、10³、10⁴倍的土壤液的稀释液，并依次分别吸取0.1ml进行平板涂布操作．在适宜条件下培养，当菌落数目稳定时，对各稀释度涂布的三个平板进行菌落计数（如表）．

序号	Ⅰ	Ⅱ	Ⅲ
稀释度104倍	5	8	3
稀释度103倍	178	191	156
稀释度102倍	418	511	389

则每克土壤样品中的酵母菌数量约为1.75×10⁷个．要使该实验所得数据可靠，还应该实施的操作是同时在各稀释度组中，另加一个平板接种无菌水作为对照．
（2）柿子醋生产菌的制备：
为去掉酵母菌，挑取变酸的柿子酒内的菌膜于30〜35℃进行纯化培养，获得图1所示菌落分布．应从丙（填“甲”“乙”或“丙”）区域中挑取部分菌落制玻片观察，选择所需菌种．
（3）柿子酒、柿子醋的制作（发酵装置如图2所示）：
①排气口弯管设置的目的是在酒精发酵时用来排出C0₂，防止空气中微生物的污染．
②可通过装置中的出料口对发酵情况进行及时监测．此时，若采用血细胞计数板对发酵液的酵母菌观察计数，与（1）中计数方法相比，该计数方法测得的酵母菌数目较多．
③柿子醋可在柿子酒生产的基础上改变菌种和环境条件进行生产．

Answer 1

分析 1、从土壤中分离微生物的一般步骤是：土壤取样、选择培养、梯度稀释、涂布培养和筛选菌株．筛选目的菌的培养基应该是选择培养基，培养基制作完成后进行灭菌处理，所有操作应该确保无菌操作．常用的固体培养基上的接种方法是稀释涂布平板法和平板划线法．
2、酵母菌在有氧和无氧的条件下都能生活：在有氧时，酵母菌大量繁殖，但是不起到发酵效果；在无氧时，繁殖速度减慢，但是此时可以进行发酵．
3、醋酸菌好氧性细菌，当缺少糖源时和有氧条件下，可将乙醇（酒精）氧化成醋酸；当氧气、糖源都充足时，醋酸菌将葡萄汁中的糖分解成醋酸．

解答 解：（1）①为了避免微生物的污染，用灭过菌的小铁铲、信封取该处土样、并在火焰旁称取10g土样，加入盛有90ml无菌水的锥形瓶中，充分摇匀．而后进行系列稀释操作：吸取锥形瓶中土壤液的上清液1ml，转移至盛有9ml无菌水的大试管中充分摇匀，依次等比稀释，获得稀释至10¹、10²、10³、10⁴倍的土壤液的稀释液．
②由于一般选择菌落数在30-300的平板进行计数，因此选择“稀释度10³倍”进行计算，每克土壤样品中的酵母菌数量约=（178+191+156）÷3÷0.1×10³×10²÷10=1.75×10⁷个．要使该实验所得数据可靠，还应该实施的操作是同时在各稀释度组中，另加一个平板接种无菌水作为对照．
（2）酵母菌适宜生存的温度为18～25℃，为去掉酵母菌，挑取变酸的柿子酒内的菌膜（醋酸菌）于30〜35℃进行纯化培养，获得图1所示菌落分布．丙中已形成单个菌落，因此需要从丙区域中挑取部分菌落制玻片观察，选择所需菌种．
（3）①排气口弯管设置的目的是在酒精发酵时用来排出C0₂，防止空气中微生物的污染．
②可通过装置中的出料口对发酵情况进行及时监测．此时，若采用血细胞计数板对发酵液的酵母菌观察计数，与（1）中计数方法相比，该计数方法测得的酵母菌数目较多．
③柿子醋可在柿子酒生产的基础上改变菌种和环境条件进行生产，即菌种由酵母菌改为醋酸菌，环境条件有无氧、18～25℃改为通入氧气、30～35℃．
故答案为：
（1）①火焰   1   ②1.75×10⁷ 同时在各稀释度组中，另加一个平板接种无菌水作为对照
（2）30〜35 丙
（3）①在酒精发酵时用来排出C0₂，防止空气中微生物的污染
②出料口多
③菌种和环境条件

点评 本题考查了微生物的分离与培养以及果酒、果醋的制作，要求考生掌握微生物分离与纯化的方法，掌握果酒、果醋制作的原理以及不同的环境条件，再结合所学知识准确答题．