Question

3．某学校打算开辟一块食用菌栽培基地，以丰富学生的劳动技术课内容。首先对食用菌实验室进行清扫和消毒处理，准备食用菌栽培所需的各种原料和用具，然后从菌种站购来各种食用菌菌种。请回答下列问题：

(1)对买回来的菌种进行扩大培养，首先制备试管培养基，写出制备固体牛肉膏蛋白胨培养基所需的原料：__________、__________、__________、__________、__________。其中提供氮源的是__________；提供碳源的主要物质是__________________。

(2)微生物在生长过程中对各种成分所需量不同，配制培养基时各成分要有合适的__________。在烧杯中加入琼脂后要不停地__________，防止__________。

(3)将配制好的培养基分装到试管中，加棉塞后若干个试管一捆，包上牛皮纸并用皮筋勒紧放入__________中灭菌，压力__________kPa，温度__________，时间__________。灭菌完毕拔掉电源，待锅内压力自然降到0时，将试管取出。如果棉塞上沾有培养基，此试管应______________________。

(4)使用高压蒸汽灭菌锅时注意，先向锅内倒入__________。把锅内水加热煮沸并将其中原有冷空气彻底排出后将锅密闭。

(5)从一支试管向另一支试管接种时注意，接种环要在酒精灯__________(填“内”或“外”)焰灭菌，并且待接种环__________后蘸取菌种，试管口不能离开酒精灯火焰附近，将接种的试管在适温下培养，长成菌落后放入__________℃冰箱中保存。

Answer 1

答案：(1)牛肉膏　蛋白胨　水　无机盐　琼脂　蛋白胨、牛肉膏　牛肉膏

(2)比例　搅拌　琼脂糊底引起烧杯破裂

(3)高压蒸汽灭菌锅　100　121 ℃　15～30 min　废弃

(4)适量水　(5)外　冷却　4

解析：本题主要考查对食用菌菌种扩大培养并保存的过程中涉及的培养基配制、灭菌及菌种转移和保藏的一些基础知识。

(1)牛肉膏蛋白胨固体培养基配方

牛肉膏	蛋白胨	NaCl	琼脂	蒸馏水
5.0 g	10.0 g	5.0 g	20.0 g	定容至1 000 mL

由配方可知所需的原料；凡能提供所需氮元素的物质为氮源，牛肉膏、蛋白胨均含氮元素。

(2)在配制培养基时营养要协调，按所培养微生物对各种成分的需求确定；在加入琼脂后，要不断搅拌，防止琼脂糊底而导致烧杯破裂。

(3)玻璃器皿的灭菌应用高压蒸汽灭菌，在压力为100 kPa、温度为121 ℃条件下，灭菌15～30 min。若棉塞上沾有培养基，易被杂菌污染，应作废。

(4)不加水，无从谈起高压蒸汽，还有可能损坏设备。

(5)酒精灯外焰温度高，灭菌效果好。灼烧后待冷却再蘸取菌种，否则会烫死菌种造成实验失败。