Question

【题目】人和哺乳动物的尿含有尿素，大量尿素的存在会对环境造成污染。土壤中有些细菌含有脲酶，可通过降解尿素作为其生长的氮源。现对土壤中的这类细菌进行分离实验，请回答下列问题：

（1）分离培养细菌时必须进行无菌操作，包括培养基和各种器皿都必须是无菌的，常用的灭菌方法有_________（至少答2种）。

（2）将样液进行一系列的梯度稀释，然后接种培养。在稀释土壤溶液的过程中每一步都要在________旁进行操作。接种后的培养皿______于37℃的_______中培养。

（3）用含有酚红指示剂的培养基筛选能分泌脲酶的细菌，从功能上划分该培养基属于________培养基。若培养基中存在有分解尿素的细菌，其菌落周围会出现红色环带，这是由于尿素被分解产生的________使pH升高，酚红指示剂产生的颜色变化，从而证明这一菌株可以尿素为氮源。变色区域越大，表明该菌株利用尿素的能力_________。

（4）与完全营养培养基中的菌落相比，以尿素为氮源的培养基中菌落数____________。

A. 多 B. 少 C. 相等 D. 几乎为零

Answer 1

【答案】高压蒸汽灭菌、干热灭菌 酒精灯火焰 倒置 恒温培养箱 选择 氨 越强 B

【解析】

分离纯化某种微生物最关键就是无菌操作技术，如不能通过高温高压加热灭菌的必须进行消毒，能在高温下灭菌可采用干热灭菌，为了防止水分蒸发的可采用高压蒸汽灭菌等方法；

分离纯化土壤中能分解尿素的分解菌，常常在选择培养基中只添加唯一氮源——尿素，要检测尿素分解菌是否分泌脲酶分解尿素，可依据尿素分解产生的氨能让酚酞指示剂变红的原理进行检测。如果在加入酚酞指示剂的培养基中存在尿素分解菌的菌落，则菌落周围会出现红色圈带，且红色圈带越大，该菌落分解尿素的能力越强。

（1）对培养基和各种器皿灭菌的常用方法是高压蒸汽灭菌，如果是玻璃或金属材质的各种器皿还可用干热灭菌。

（2）为了保证无菌操作，在稀释土壤溶液的过程中每一步都要在酒精灯火焰旁进行操作。接种后的培养皿倒置于37℃的恒温培养箱中培养。

（3）由于培养基中含有的唯一氮源是尿素，具有筛选功能，所以该培养基从功能上划分应为选择培养基。由于酚红指示剂与尿素分解产生氨结合显红色，所以若培养基中存在有分解尿素的细菌，其菌落周围会出现红色环带，这是由于尿素被分解产生的氨使pH升高，酚红指示剂产生的颜色变化，从而证明这一菌株可以尿素为氮源。变色区域越大，表明该菌株利用尿素的能力越强。

（4）与完全营养培养基中的菌落相比，以尿素为氮源的培养基中菌落数更少，故选B。