Question

人的血清白蛋白（HSA）在临床上需求量很大，通常从人血中提取。但由于艾滋病病毒(HIV)等人类感染性病原体造成的威胁与日俱增，使人们对血液制品顾虑重重。如果应用基因工程和克隆技术，将人的血清白蛋白基因转入奶牛细胞中，那么利用牛的乳汁生产血清白蛋白就成为可能。其大致过程如下：

I．采集良种供体奶牛的卵母细胞和精液，通过体外受精，形成奶牛受精卵；

II．将人血清白蛋白基因导入奶牛受精卵，形成重组细胞；

III．电脉冲刺激重组细胞促使其形成早期胚胎；

IV．将胚胎移植到受体母牛的子宫中，最终发育成转基因小牛。

请回答下列问题：

（1）一般情况下，良种奶牛所产生的能用于体外受精的卵母细胞往往数量不足，请举出一种可以获得更多卵母细胞的方法：  　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　。

（2）步骤I中，在体外受精前，需要对奶牛的精子进行  　　  处理。受精时，往往一个卵母细胞只能和一个精子结合，受精过程中防止多精入卵的生理反应包括  　　    反应和卵黄膜封闭作用。

（3）步骤II中，将人的血清白蛋白基因导入奶牛受精卵最为有效的方法是  　　     。导入基因前，需要将血清白蛋白基因与奶牛乳腺蛋白基因的启动子等调控组件重组在一起，这一步骤属于基因工程“四步曲”中的  　　，此步骤的目的是  　　         ，其中将血清白蛋白基因与调控组件结合时必须用到限制性核酸内切酶和     　　    酶。

（4）实验步骤III中，进行动物早期胚胎的体外培养时，培养液中除了含有各种有机盐类、维生素、氨基酸、核苷酸等营养成分外，还要添加  　　  和动物血清。

（5）实验步骤IV中，应选择性别为 　　  的奶牛胚胎进行移植。请举出一种人工控制或筛选胚胎性别的方法：　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　。

（6）若需迅速得到大量转基因奶牛，现有两种处理方法：

方法A：在步骤IV中将早期胚胎分离成若干个胚胎细胞，让其分别发育成一头小牛。进行上述操作时，应选择发育至  　　　　  阶段的胚胎进行操作，分割时必须注意要将早期胚胎中的  　　　　  均等分割。

方法B：在步骤IV中将早期胚胎细胞的细胞核移植到普通黄牛的  　　  细胞中，使其重组并发育成新胚胎。为获得大量可供移植的胚胎细胞核，可将早期胚胎细胞分离出来，在添加了抑制因子的培养液中，将其培养成能够增殖而不发生分化的   　　   细胞，再从该细胞中提取所需的细胞核。

上述两种方法中，最能保持步骤IV中早期胚胎细胞遗传特征的是方法  　　  。

Answer 1

（1）①用促性腺激素处理良种母牛（使其超数排卵）  

②从屠宰场已屠宰母牛的卵巢中采集、培养   

（2）获能  透明带

（3）显微注射技术　　基因表达载体的构建  　使人血清白蛋白基因能够在奶牛乳腺细胞中稳定存在，并可遗传给下一代。同时能够表达和发挥作用      DNA连接

（4）激素    

（5）雌性

①X精子与Y精子分离技术（选择X型精子进行体外受精）  

②显微镜镜检法（利用显微镜观察胚胎细胞性染色体确定胚胎性别）   

③SRY—PCR胚胎的性别鉴定技术［利用SRY基因（Y染色体上的性别决定基因）作为探针，对胚胎细胞的DNA进行检测］

（6）桑椹胚或囊胚    内细胞团  　去核卵母  　胚胎干 　　A