Question

【题目】回答与枯草杆菌纯化和a-淀粉酶固定化过程有关的问题：

（1）培养基的准备：在对培养基进行高压蒸汽灭菌的过程中，完成加水、装锅、加热排气、 保温保压适当时间后，切断热源，让灭菌锅内温度自然下降，压力表的读数______________， 打开排气阀，旋开固定螺栓，开盖，才可以取出灭菌的培养基等物品。待培养基冷却至______________左右时倒平板。

（2）枯草杆菌是生产a-淀粉酶的优良菌种，为确定合适的稀释倍数，小组成员取1mL菌原 液进行如图1所示的操作，在无菌条件下，用______________取0． 1 mL稀释后的菌悬液进行 图2中____________所示的操作，接种后的平板在培养时的放置应如图3______________（选填“a”或“b”）所示。在统计菌落时，发现平板上的平均菌落数为33个，则每毫升菌原液中的细菌数大约为______________个。

（3）a-淀粉酶宜采用吸附法进行固定化，下列关于反应柱的理解，正确的是______________

A．反应物和酶均可自由通过反应柱B．反应物和酶均不能通过反应柱

C．反应物能通过反应柱，酶不能通过反应柱D．反应物不能通过，酶能通过

（4）为了确定筛选出的a-淀粉酶的应用价值，还需要进一步检测固相a-淀粉酶的活性，在该实验中，亲和层析洗脱液中加入KI-I2指示剂后，试管中呈现______________色。相对于唾液淀粉酶，枯草杆菌产生的a-淀粉酶具有______________特性，从而有利于工业生产。

Answer 1

【答案】降为零 60°C 移液枪（移液器） 甲 a 3．3×105个 C 红色 耐高温

【解析】

1、微生物常见的接种的方法

①平板划线法：将已经熔化的培养基倒入培养皿制成平板，接种，划线，在恒温箱里培养。在线的开始部分，微生物往往连在一起生长，随着线的延伸，菌数逐渐减少，最后可能形成单个菌落。

②稀释涂布平板法：将待分离的菌液经过大量稀释后，均匀涂布在培养皿表面，经培养后可形成单个菌落。

2、固定化酶有物理法和化学法两大类：物理方法包括物理吸附法、包埋法等，化学法包括交联法等。缺点：不利于催化一系列的酶促反应；优点：①既能与反应物接触，又能与产物分离；②可以反复利用。

（1）培养基的准备：在对培养基进行高压蒸汽灭菌的过程中，完成加水、装锅、加热排气、保温保压适当时间后，切断热源，让灭菌锅内温度自然下降，压力表的压力降为零，打开排气阀，旋开固定螺栓，开盖，才可以取出灭菌的培养基等物品。待培养基冷却至60℃左右时倒平板。

（2）为确定合适的稀释倍数，小组成员取1mL菌原 液进行如图1所示的操作，在无菌条件下，用移液枪取0.1 mL稀释后的菌悬液进行，因要对细菌进行计数，故选用稀释涂布平板法进行接种，即图2中甲所示的操作，接种后的平板在培养时的应该倒放，即如图3中a所示。由图1可知，菌原液被稀释了103倍，在统计菌落时，发现平板上的平均菌落数为33个，则每毫升菌原液中的细菌数大约为33×10×103=3.3×105个。

（3）反应柱的底端分布着许多小孔的筛板，酶颗粒无法通过，反应溶液可以自由通过，故α-淀粉酶宜采用吸附法进行固定化时反应物能通过反应柱，酶不能通过反应柱，C正确。

故选C。

（4）酶柱中有α-淀粉酶，淀粉溶液经酶柱后的流出液，淀粉被水解成糊精，加人KI-I2溶液后呈红色。与唾液淀粉酶相比，枯草杆菌产生的α-淀粉酶是适宜温度在50~70℃，因此具有耐高温的特点，有利于生产。