为了得到普洱茶中产蛋白酶的微生物.研究人员进行了一系列筛选.检测．(1)研究人员称取普洱茶1g.加入99mL无菌水.制备稀释102倍的茶叶水．再将茶叶水进行梯度稀释.获得A103.104.105倍的稀释茶叶水．取100μL稀释茶叶水.用涂布法接种到奶粉培养基.37℃条件下培养4-5天.在培养基中选择菌落周围的透明圈较大的菌株作为目的菌株� 题目和参考答案——青夏教育精英家教网—

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8．为了得到普洱茶中产蛋白酶的微生物，研究人员进行了一系列筛选、检测．
（1）研究人员称取普洱茶1g，加入99mL无菌水，制备稀释10²倍的茶叶水．再将茶叶水进行梯度稀释，获得A103、10⁴、10⁵倍的稀释茶叶水．取100μL稀释茶叶水，用（稀释）涂布法接种到奶粉培养基，37℃条件下培养4-5天，在培养基中选择菌落周围的透明圈（或“水解圈”）较大的菌株作为目的菌株．
（2）将获得的多个目的菌株接种于液体茶汤培养基中培养．已知氨基酸都能够和茚三酮反应生成蓝紫色物质，因此可以利用分光光度计测定茶汤中游离氨基酸的量．先用已知浓度的氨基酸溶液测定结果绘制标准曲线，再分别测定培养每个菌株的液体茶汤培养基的吸光值，与标准曲线比较，计算出该茶汤中游离氨基酸的量，氨基酸含量高的，即为蛋白酶产生量高的菌株．该实验中应测定不接种（或“接种灭活菌株”）的液体茶汤培养基的游离氨基酸含量，作为对照组的数据．

分析微生物常见的接种的方法：
①平板划线法：将已经熔化的培养基倒入培养皿制成平板，接种，划线，在恒温箱里培养．在线的开始部分，微生物往往连在一起生长，随着线的延伸，菌数逐渐减少，最后可能形成单个菌落．
②稀释涂布平板法：将待分离的菌液经过大量稀释后，均匀涂布在培养皿表面，经培养后可形成单个菌落．

解答解：（1）在稀释涂布平板法中，首先对溶液进行梯度稀释，即称取普洱茶1g，加入99mL无菌水，可制备稀释10²倍的茶叶水．再将茶叶水进行梯度稀释，获得A10³、10⁴、10⁵倍的稀释茶叶水．取100μL稀释茶叶水，用（稀释）涂布法接种到奶粉培养基，37℃条件下培养4-5天，由于该茶叶中含有能够产生蛋白酶的微生物，因此在培养基中选择菌落周围的透明圈（或“水解圈”）较大的菌株作为目的菌株．
（2）已知氨基酸都能够和茚三酮反应生成蓝紫色物质，因此可以利用分光光度计测定茶汤中游离氨基酸的量．先用已知浓度的氨基酸溶液测定结果绘制标准曲线，再分别测定培养每个菌株的液体茶汤培养基的吸光值，与标准曲线比较，计算出该茶汤中游离氨基酸的量，氨基酸含量高的，即为蛋白酶产生量高的菌株．该实验中应测定不接种（或“接种灭活菌株”）的液体茶汤培养基的游离氨基酸含量，作为对照组的数据．
故答案为：
（1）99mL无菌水（稀释）涂布透明圈（或“水解圈”）
（2）已知浓度的氨基酸溶液测定结果蛋白酶产生量高不接种（或“接种灭活菌株”）

点评本题考查了微生物分离与纯化的有关知识，要求考生能够掌握微生物常见接种的方法，能够根据题干信息筛选产蛋白酶高的微生物，再结合所学知识准确答题．

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（1）光合色素分布于金鱼藻细胞的上。三碳酸还原直接利用的能量是，其还原产物大部分用于。

（2）ph由6降为4，可能由于金鱼藻细胞的遭受到损伤，透性变大，导致呼吸底物与酶接触面大增大促使的升高。

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	C．	葡萄糖中的能量在经①过程全部转移至丙酮酸中
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3．

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（3）为证实上述推测，研究者进一步观察不同叶位叶片的叶绿体超微结构，得到下表所示结果．

叶位	基粒厚度（μm）	片层数
上位叶	1.79	10.90
中上位叶	2.46	17.77
基部叶	3.06	17.91

①叶绿体基粒厚度和片层数等超微结构的必须在电子显微镜下观察．实验结果表明，不同叶位叶片光合速率的高低与叶绿体超微结构的观察结果不一致．
②叶绿体中光合色素分子对光的吸收发生在类囊体膜上，虽然基部叶的叶绿体超微结构特征是对弱光的一种适应，但是基部叶光合速率仍然最低．因此进一步推测，除了叶龄因素外，光合速率的差异可能还与叶片接受的光照强度不同有关．
（4）为证实（3）中推测，可在同一光照强度下测定不同叶位叶片的光合速率，与（2）的结果相比较，若不同叶位叶片光合速率的差异减小，则证实这一推测．
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