根据基因工程有关内容回答下列问题:(1)在基因工程的基本操作程序中.核心的步骤是基因表达载体的构建．(2)构建基因的表达载体时.需要用DNA连接酶将目的基因和运载体连接起来．(3)利用PCR技术扩增目的基因的前提.是要有一段已知目的基因的核苷酸序列.以便根据这一序列合成引物．(4)常用的将目的基因导入微生物细胞的方法是用Ca2+(� 题目和参考答案——青夏教育精英家教网—

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1．根据基因工程有关内容回答下列问题：
（1）在基因工程的基本操作程序中，核心的步骤是基因表达载体的构建．
（2）构建基因的表达载体时，需要用DNA连接酶将目的基因和运载体连接起来．
（3）利用PCR技术扩增目的基因的前提，是要有一段已知目的基因的核苷酸序列，以便根据这一序列合成引物．
（4）常用的将目的基因导入微生物细胞的方法是用Ca²⁺（或CaCl₂）处理受体细胞，使其成为能吸收周围环境中DNA分子的感受态细胞．
（5）某农科院开展“转基因抗虫棉”的科技研究，成功地将某种能产生抗虫毒蛋白的细菌的抗虫基因导入棉花细胞中，得到的棉花新品种对棉铃虫的毒杀效果高达80%以上．
应用Ti质粒的原因是其上的T-DNA可转移到受体细胞并整合到受体细胞的基因组DNA上，因此携带外源基因的DNA片段必须插入到植物细胞染色体上（部位）．
（6）在基因工程的第四步中，要检测转基因生物的目的基因是否转录出了mRNA，采用的方法是分子杂交技术．

分析基因工程技术的基本步骤：
（1）目的基因的获取：方法有从基因文库中获取、利用PCR技术扩增和人工合成．
（2）基因表达载体的构建：是基因工程的核心步骤，基因表达载体包括目的基因、启动子、终止子和标记基因等．
（3）将目的基因导入受体细胞：根据受体细胞不同，导入的方法也不一样．将目的基因导入植物细胞的方法有农杆菌转化法、基因枪法和花粉管通道法；将目的基因导入动物细胞最有效的方法是显微注射法；将目的基因导入微生物细胞的方法是感受态细胞法．
（4）目的基因的检测与鉴定：分子水平上的检测：①检测转基因生物染色体的DNA是否插入目的基因--DNA分子杂交技术；②检测目的基因是否转录出了mRNA--分子杂交技术；③检测目的基因是否翻译成蛋白质--抗原-抗体杂交技术．个体水平上的鉴定：抗虫鉴定、抗病鉴定、活性鉴定等．

解答解：（1）基因工程的核心步骤是基因表达载体的构建．
（2）构建基因的表达载体时，需要用DNA连接酶将目的基因和运载体连接起来．
（3）利用PCR技术扩增目的基因的前提，是要有一段已知目的基因的核苷酸序列，以便根据这一序列合成引物．
（4）将目的基因导入微生物细胞常用感受态转化法，即用 Ca²⁺（或CaCl₂）处理受体细胞，使其成为能吸收周围环境中DNA分子的感受态细胞．
（5）农杆菌转化的原理：农杆菌中的Ti质粒上的T-DNA可转移至受体细胞，并且整合到受体细胞染色体的DNA上．根据农杆菌的这一特点，如果将目的基因插入到Ti质粒的T-DNA上，通过农杆菌的转化作用，就可以把目的基因整合到植物细胞中染色体的DNA上．
（6）检测目的基因是否转录出mRNA可采用分子杂交技术．
故答案为：
（1）基因表达载体的构建
（2）DNA连接酶
（3）引物
（4）Ca²⁺（或CaCl₂）感受态细胞
（5）T-DNA 染色体
（6）分子杂交技术

点评本题考查基因工程的相关知识，要求考生识记基因工程的原理、操作步骤，掌握各操作步骤中需要注意的细节，能结合所学的知识准确答题．

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