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    【题目】利用农杆菌转化法可将抗病基因（来自拟南芥）导入玉米细胞而获得抗病植株。根据所学知识回答下列问题：

    （1）若对拟南芥的抗病基因进行大量扩增，应用____________技术。

    （2）获得抗病玉米植株过程中的核心步骤是_______，其目的是使抗病基因在受体细胞中稳定存在，并能遗传给下一代，同时使______。

    （3）农杆菌转化法利用农杆菌中的Ti质粒上的 _____可以转移到受体细胞，并整合到受体细胞的___________上的特点，使抗病基因在受体细胞中的遗传特性得以稳定维持和表达。

    （4）含抗病基因的受体细胞培育为抗病植株的原理是______________。

    （5）若要在个体水平上检测转基因玉米是否有抗病特性，需要做_________实验。

    （6）为避免抗病基因通过花粉传播进入其他植物而导致“基因污染”，应将抗病基因导入到_____（填“细胞核”或“细胞质”）。

    【答案】PCR 构建基因表达载体 抗病基因能够表达和发挥作用 T-DNA 染色体DNA （植物）细胞具有全能性 病原体的接种（或“抗病的接种”） 细胞质

    【解析】

    1、基因工程技术的基本步骤：

    （1）目的基因的获取：方法有从基因文库中获取、利用PCR技术扩增和人工合成。

    （2）基因表达载体的构建：是基因工程的核心步骤，基因表达载体包括目的基因、启动子、终止子和标记基因等。

    （3）将目的基因导入受体细胞：根据受体细胞不同，导入的方法也不一样。将目的基因导入植物细胞的方法有农杆菌转化法、基因枪法和花粉管通道法；将目的基因导入动物细胞最有效的方法是显微注射法；将目的基因导入微生物细胞的方法是感受态细胞法。

    （4）目的基因的检测与鉴定：分子水平上的检测：①检测转基因生物染色体的DNA是否插入目的基因--DNA分子杂交技术；②检测目的基因是否转录出了mRNA-分子杂交技术；③检测目的基因是否翻译成蛋白质--抗原-抗体杂交技术。个体水平上的鉴定：抗虫鉴定、抗病鉴定、活性鉴定等。

    2、载体具备的条件：①能在受体细胞中复制并稳定保存．

    ②具有一至多个限制酶切点，供外源DNA片段插入。

    ③具有标记基因，供重组DNA的鉴定和选择。

    3、农杆菌转化法（约80%的转基因植物都是用这种方法获得的）：

    ①农杆菌特点：易感染双子叶植物和裸子植物，对单子叶植物没有感染力；Ti质粒的T-DNA可转移至受体细胞，并整合到受体细胞的染色体上。

    ②转化：目的基因插人Ti质粒的T-DNA上进入农杆菌→导入植物细胞→目的基因整合到植物细胞染色体上→目的基因的遗传特性得以稳定维持和表达。

    （1）目的基因体外扩增技术为PCR技术。

    （2）获得转基因植株的核心步骤是基因工程的第二步构建基因表达载体，其目的是使抗病基因（目的基因）在受体细胞中稳定存在，并能遗传给下一代，同时使抗病基因（目的基因）能够表达和发挥作用。

    （3）农杆菌转化法利用农杆菌中的Ti质粒上的T-DNA可以转移到受体细胞，并整合到受体细胞染色体的DNA上的特点，使抗病基因在受体细胞中的遗传特性得以稳定维持和表达。

    （4）含抗病基因的受体细胞培育为抗病植株是通过植物组织培养的过程，所以其原理是（植物）细胞具有全能性。

    （5）若要从个体水平检测转基因玉米是否有抗病特性，应做病原体的接种实验。

    （6）为了避免抗病基因通过花粉传播，导致基因污染，花粉中含有核基因，几乎不含质基因，所以应将抗病基因导入到受体细胞的细胞质中。

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