[题目]图1表示含有目的基因D的DNA片段长度(bp即碱基对)和部分碱基序列.图2表示一种质粒的结构和部分碱基序列.现有MspI.BamHI.MboI.SmaI 4种限制性核酸内切酶切割的碱基序列和酶切位点分别为C↓CGG.G↓GATCC.↓GATC.CCC↓GGG.请回答下列问题:(1)若用限制酶SmaI完全切割图1中DNA片段.其产物长度为 .(2)若图1中虚线方框内� 题目和参考答案——青夏教育精英家教网—

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【题目】图1表示含有目的基因D的DNA片段长度（bp即碱基对）和部分碱基序列，图2表示一种质粒的结构和部分碱基序列，现有MspI、BamHI、MboI、SmaI 4种限制性核酸内切酶切割的碱基序列和酶切位点分别为C↓CGG、G↓GATCC、↓GATC、CCC↓GGG，请回答下列问题：

（1）若用限制酶SmaI完全切割图1中DNA片段，其产物长度为_____________。

（2）若图1中虚线方框内的碱基对被T-A碱基对替换，那么基因D就突变为基因d。从隐性纯合子分离出图1及其对应的DNA片段，用限制酶SmaI完全切割，产物中共有____种不同DNA片段。为了提高实验成功率，需要通过_________技术扩增目的基因，以获得大量的目的基因。

（3）若将图2中质粒和目的基因D通过同种限制酶处理后进行，形成重组质粒，那么应选用的限制酶是______________。在导入重组质粒后，为了筛选出含质粒的大肠杆菌，一般先用添加_________的培养基进行培养，然后将生长的菌接种到只含____________的培养基中培养，可进一步筛选出含重组质粒的受体细胞。

（4）假设用BamHI切割DNA获取目的基因，用MboI切割质粒，然后形成重组质粒，若将插入在抗生素B抗性基因处的目的基因重新切割下来，能否用BamHI? _____（能，不能，不一定）。因为目的基因和抗生素B抗性基因拼接处_______________。

【答案】537bp、790bp、661bp 两 PCR BamHⅠ 抗生素B 抗生素A 不一定不一定出现GGATCC

【解析】

分析题图：外源DNA含有BamHI、MboI、SmaI3种限制性核酸内切酶的识别序列，其中限制酶MspⅠ和SmaⅠ的切割位点在目的基因上。质粒含有MspI、BamHI、MboI3种限制性核酸内切酶的识别序列，其中BamHI酶的切割位点位于抗生素A的抗性基因上；MboI酶的切割位点位于抗生素B和抗生素A的抗性基因上。

（1）图1中DNA片段含有两个SmaⅠ酶切位点，被SmaⅠ酶完全切割后出现三个长度的片段，分别是537bp、790bp、661bp。

（2）D突变成d由于碱基对替换的位置发生在SmaⅠ的位置，所以基因d的序列中含有一个识别位点，经过切割后会产生1327bp和661bp两种长度的片段。为了提高实验成功率，需要通过PCR技术扩增目的基因，以获得大量的目的基因。

（3）限制酶MspⅠ和SmaⅠ的切割位点位于目的基因D上，若用这两种酶切割会被破坏目的基因D；运载体的两个标记基因上都有限制酶MboⅠ的切割位点，用该酶切割会破坏这两个标记基因，因此只能选用限制酶BamHⅠ切割外源DNA分子和运载体；用限制酶BamHⅠ切割质粒会破坏抗生素A抗性基因，但不会破坏抗生素B抗性基因，所以导入重组质粒的大肠杆菌能在含有抗生素B的培养基上生存，因此为了筛选出含重组质粒的大肠杆菌，一般需要用添加抗生素B的培养基培养；然后将生长的菌接种到只含抗生素A的培养基中培养，可进一步筛选出含重组质粒的受体细胞。

（4）用BamHⅠ切割DNA获取目的基因，用MboⅠ切割质粒，然后形成重组质粒，用BamHⅠ不一定将插入在抗生素B抗性基因处的目的基因重新切割下来，因为目的基因和抗生素B抗性基因拼接处含有GATC，不一定出现GGATCC。

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病毒感染类型	茎尖大小/（mm）	病毒保存率/（%）
PLRV	0．5	0（0/20）
PLRV	1．5	35（7/20）

注：括号内数字表示检测阳性样本量/检测总样本量。

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（1）哺乳动物受到寒冷刺激后，通过______________（神经/体液/神经-体液）调节促进甲状腺激素分泌，使机体产生更多热量以维持体温。

（2）活跃分裂的动物细胞多是二倍体细胞，多倍体细胞通常不能分裂。

①对比不同动物心脏中二倍体细胞所占比例及其甲状腺激素水平，结果如图。恒温动物的心脏组织因二倍体细胞比例______________，再生能力较差；同时体内甲状腺激素水平______。由此表明甲状腺激素水平与心脏组织再生能力呈负相关。

②制备基因工程小鼠，使其心脏细胞缺乏甲状腺激素受体，导致心脏细胞不受______调节。与正常小鼠相比，基因工程小鼠体内的甲状腺激素________________正常小鼠心脏组织再生能力。

③以斑马鱼为材料进一步研究。将成年斑马鱼分成A、B两组，分别饲养在不同水箱中，A组作为对照，B组加入甲状腺激素。若________组斑马鱼心脏组织受损后的再生能力比另一组弱，则证明甲状腺激素对变温动物斑马鱼心脏组织再生能力的影响与对恒温动物小鼠的影响一致。

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实验处理	蛋白质种类						处理后红细胞影的形状
实验处理	A	B	C	D	E	F	处理后红细胞影的形状
试剂甲处理后	+	+	+	+	-	-	变得不规则
试剂乙处理后	-	-	+	+	+	+	还能保持

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