Question

根据所学生物学知识回答下列问题：
（1）若要将某目的基因通过农杆菌转化法导入植物细胞，先要将目的基因插入农杆菌Ti质粒的

 

中，然后用该农杆菌感染植物细胞，通过DNA重组将目的基因插入植物细胞的

 

上．
（2）目前临床上使用的红细胞生成素（一种糖蛋白，用于治疗肾衰性贫血）

 

主要来自基因工程技术生产的重组人红细胞生成素（rhEPO）．检测rhEPO的体外活性需用抗rhEPO的单克隆抗体．分泌该单克隆抗体的细胞，可由rhEPO免疫过的小鼠B淋巴细胞与小鼠骨髓瘤细胞融合而成，在融合过程中至少需要进行

 

次筛选．
（3）在“试管牛”的培育过程中，采用激素处理可使良种母牛一次排出多枚卵母细胞，最常用的激素是

 

．从良种公牛采集的精子需

 

后才能进行受精作用；防止多精入卵的两道屏障依次为

 

、

 

．
（4）生态系统内即使某个物种由于某种原因而死亡，也会很快有其他物种占据它原来的生态位置，从而避免系统结构或功能失衡．这体现了生态工程的什么原理

 

A．协调与平衡原理      B．物种多样性原理C．物质循环再生原理  D．整体性原理
（5）下表为几种限制性核酸内切酶识别的序列和切割的位点．

限制酶	BamHⅠ	EcoRⅠ	PstⅠ
识别序列和切割位点

如图，已知某DNA在目的基因的两端1、2、3、4四处有BamHⅠ或EcoRⅠ或PstⅠ的酶切位点．现用BamHⅠ和PstⅠ两种酶同时切割该DNA片段（假设所用的酶均可将识别位点完全切开），下列各种酶切位点情况中，可以防止酶切后单个含目的基因的DNA片段自身连接成环状的是

 

．
A．1 为PstⅠ，2为EcoRⅠ，3为EcoRⅠ，4为BamHⅠ
B．1 为EcoRⅠ，2为BamHⅠ，3为BamHⅠ，4为PstⅠ
C．1 为BamHⅠ，2为EcoRⅠ，3为BamHⅠ，4为PstⅠ
D．1 为EcoRⅠ，2为PstⅠ，3为PstⅠ，4为BamHⅠ
（6）运用基因工程技术已经创造出了“蜘蛛羊”，该羊的乳汁中含有蛛丝蛋白，高强度的蛛丝蛋白可用于许多重要的特种工业领域．为保证实验成功，产生蛛丝蛋白的基因需从cDNA文库中获取，并与

 

等调控组件重组在一起，然后与载体相连构建成为表达载体；再通过

 

方法，将表达载体导入羊的

 

，获得重组细胞．将获得的重组细胞培养成早期胚胎后，移植到经过

 

处理的受体母羊子宫内．因为我们对细胞所需的营养条件还没有完全研究清楚，所以在早期胚胎的培养中，往往还需要添加

 

．

Answer 1

考点：基因工程的原理及技术,胚胎移植

专题：

分析：1、农杆菌转化发生的原理：农杆菌中的Ti质粒上的T-DNA可转移至受体细胞，并且整合到受体细胞染色体的DNA上．根据农杆菌的这一特点，如果将目的基因插入到Ti质粒的T-DNA上，通过农杆菌的转化作用，就可以把目的基因整合到植物细胞中染色体的DNA上．
2、单克隆抗体制备流程：先给小鼠注射特定抗原使之发生免疫反应，之后从小鼠脾脏中获取已经免疫的B淋巴细胞；诱导B细胞和骨髓瘤细胞融合，利用选择培养基筛选出杂交瘤细胞；进行抗体检测，筛选出能产生特定抗体的杂交瘤细胞；进行克隆化培养，即用培养基培养和注入小鼠腹腔中培养；最后从培养液或小鼠腹水中获取单克隆抗体．
3、受精过程为：顶体反应→穿越放射冠→穿越透明带（透明带反应）→卵细胞膜反应（卵黄膜封闭作用）→卵子完成减数第二次分裂并释放第二极体→雌雄原核的形成、核膜消失，雌、雄原核融合形成合子→第一次卵裂开始．

解答： 解：（1）农杆菌转化法是现将目的基因组合到农杆菌Ti质粒的T-DNA上，然后把重组质粒导入到农杆菌细胞中，利用农杆菌感染植物细胞，将目的基因插入植物细胞的染色体DNA上．
（2）单克隆抗体的制备流程：首先用相应的抗原免疫小鼠，从免疫的小鼠的脾脏中提取B淋巴细胞，与小鼠骨髓瘤细胞融合，并在特定的选择培养基上筛选出杂交瘤细胞，然后在通过克隆化培养和抗体检测筛选出能产生特异性抗体的杂交瘤细胞，用该细胞进行体内培养或体外培养获得单克隆抗体．可见，该过程中进行了2次筛选．
（3）给母畜注射促性腺激素可促进其超数排卵；精子获能后才具备与成熟卵子受精的能力；防止多精受精的两道屏障：透明带反应、卵黄膜封闭作用．
（4）由“生态系统内即使某个物种由于某种原因而死亡，也会很快有其他物种占据它原来的生态位置”可知这里主要体现的是物种的多样性，所以该生态工程的原理为物种多样性原理．
（5）A、若1为PstⅠ，2为EcoRⅠ，3为EcoRⅠ，4为BamHⅠ，用BamHⅠ和PstⅠ两种酶同时切割该DNA片段，可防止酶切后单个含目的基因的DNA片段自身连接成环状，A正确；
B、若1为EcoRⅠ，2为BamHⅠ，3为BamHⅠ，4为PstⅠ，用BamHⅠ和PstⅠ两种酶同时切割该DNA片段，得到目的基因两侧都有BamHⅠ酶切形成的黏性末端，这样会导致酶切后单个含目的基因的DNA片段自身连接成环状，B错误；
C．若1为BamHⅠ，2为EcoRⅠ，3为BamHⅠ，4为PstⅠ，用BamHⅠ和PstⅠ两种酶同时切割该DNA片段，得到目的基因两侧都有BamHⅠ酶切形成的黏性末端，这样会导致酶切后单个含目的基因的DNA片段自身连接成环状，C错误；
D．若1为EcoRⅠ，2为PstⅠ，3为PstⅠ，4为BamHⅠ，用BamHⅠ和PstⅠ两种酶同时切割该DNA片段，得到目的基因两侧都有PstⅠ酶切形成的黏性末端，这样会导致酶切后单个含目的基因的DNA片段自身连接成环状，D错误．
故选：A．
（6）为了让目的基因在转基因羊的乳腺细胞中表达，需要在重组质粒中添加羊的乳腺蛋白基因的启动子．培育转基因动物的受体细胞为受精卵，导入目的基因常用显微注射法．将获得的重组细胞培养成早期胚胎后，移植到经过同期发情处理的受体母羊子宫内．因为我们对细胞所需的营养条件还没有完全研究清楚，所以在早期胚胎培养的培养基中，往往还需要添加动物血清．
故答案为：
（1）T-DNA     染色体DNA
（2）杂交瘤2
（3）促性腺激素获能透明带反应、卵黄膜封闭作用
（4）B   
（5）A
（6）羊的乳腺蛋白基因的启动子   显微注射    受精卵   同期发情   动物血清

点评：本题综合考查基因工程、细胞工程、胚胎工程和生态工程的相关知识，要求考生识记基因工程的原理及操作步骤，掌握各步骤中需要注意的细节；识记单克隆抗体的制备工程；识记胚胎移植的具体工程，能根据图中和题干要求答题．