Question

2．草甘膦是一种广谱除草剂，其除草机制是抑制植物体内EPSPS酶的合成，最终导致植物死亡．但是，它的使用有时也会影响到植物的正常生长．目前，已发现可以从一种抗草甘膦的大肠杆菌突变株中分离出EPSPS基因，若将该基因转入植物细胞内，从而获得的转基因植物就能耐受高浓度的草甘膦．
取6株植物，其中，植物A和D对草甘膦敏感，B和E对草甘膦天然具有抗性，C和F则经过了转基因处理，但是否成功还未知．图1为4种限制酶的识别序列和酶切位点，图2为含有目的基因的DNA片段及其具有的限制酶切点．据图回答下列问题：

限制酶	MspⅠ	BamHⅠ	MboⅠ	SmpⅠ
酶切位点	C↓CGG GGC↑C	G↓GATCC CCTAG↑G	↓GATC CTAG↑	CCC↓GGG GGG↑CCC

（1）若A-C浇清水，D-F浇的水中含有草甘膦，上述植物中，肯定能健康成长的是ABCE．
（2）若要从大肠杆菌中筛选出含EPSPS基因的突变菌株甲，在大肠杆菌培养基中还必须加入草甘膦．
（3）一个完整的基因表达载体除了具备复制原点、启动子和终止子外，还应包括标记基因和目的基因．
（4）若需利用酶切法获得目的基因，最应选择的限制酶是MspⅠ和SmaⅠ．
（5）通常用农杆菌转化法将EPSPS基因导入植物体内．假设EPSPS基因已被成功转移到植物F中，但植物F仍没有表现出抗性，分析可能的原因目的基因没有成功表达或表达的产物失活．

Answer 1

分析 分析表格：表中是四种限制酶的识别序列和切割位点，其中BamHⅠ的识别序列也能被MboⅠ识别和切割．
分析图2：用BamHⅠ切割会破坏目的基因，用MboⅠ切割也会破坏目的基因，因此要用酶切法获得目的基因，最应选择的限制酶是MspⅠ和SmaⅠ．

解答 解：（1）植物A和D对草甘膦敏感，B和E对草甘膦天然具有抗性，C和F则经过了转基因处理，所以A-C浇清水，都能健康成长；F虽经过了转基因处理，但是否成功还未知，所以D-F浇的水中含有草甘膦，D肯定不能健康成长，E肯定能健康成长，F未知．因此，肯定能健康成长的是ABCE．
（2）要从大肠杆菌中筛选出含EPSPS基因的突变菌株，则必须要用含草甘膦的选择培养基培养大肠杆菌．
（3）基因表达载体的组成包括复制原点、启动子、终止子、标记基因和目的基因．
（4）用BamHⅠ切割会破坏目的基因，用MboⅠ切割也会破坏目的基因，因此要用酶切法获得目的基因，最应选择的限制酶是MspⅠ和SmaⅠ，这样既可获得目的基因，也可以防止目的基因与运载体反向链接．
（5）将目的基因导入受体细胞常用农杆菌转化法．若EPSPS基因已被成功转移到植物F中，但植物F仍没有表现出抗性，可能的原因目的基因没有成功表达或表达的产物失活．
故答案为：
（1）ABCE     
（2）草甘膦   
（3）标记基因  目的基因   
（4）MspⅠSmaⅠ
（5）农杆菌转化法   目的基因没有成功表达或表达的产物失活

点评 本题结合图表，考查基因工程的相关知识，要求考生识记基因工程的原理、操作工具及操作步骤，掌握各步骤中的相关细节问题，能结合图中和表中信息准确答题，属于考纲识记和理解层次的考查．