Question

4．某质粒上有SalⅠ、HindⅢ、BamHⅠ三种限制酶切割位点，同时还含有抗四环素基因和抗氨苄青霉素基因．利用此质粒获得转基因抗盐烟草的过程如图所示，请回答下列问题：

（1）若利用PCR技术获取抗盐基因，需利用引物寻找抗盐基因的位置并进行扩增．
（2）将含有抗盐基因的烟草细胞培养为烟草植株需借助植物组织培养技术．
（3）在构建重组质粒时，应选用SalⅠ和HindⅢ两种酶对质粒和抗盐基因的DNA进行切割，以保证重组DNA序列的惟一性．
（4）为了确定抗盐烟草是否培育成功，既要用放射性同位素标记的抗盐基因作探针进行分子杂交检测，又要用一定浓度的盐水浇灌方法从个体水平鉴定烟草植株的耐盐性．

Answer 1

分析 分析图1：图示为转基因抗盐烟草的培育过程，首先构建基因表达载体；其次采用农杆菌转化法将目的基因导入受体细胞（烟草细胞）；再采用植物组织培养技术将含有目的基因的烟草细胞培养成转基因抗盐烟草．

解答 解：（1）若利用PCR技术获取抗盐基因，需利用引物寻找抗盐基因的位置并进行扩增．
（2）将含有抗盐基因的烟草细胞培养为烟草植株需借助植物组织培养技术．
（3）质粒和含有目的基因的外源DNA分子上都含有SalI、Hindm、BamHI三种限制酶切割位点，其中BamHI的切割位点位于目的基因上，用该酶切割会破坏目的基因；若只用SalI一种限制酶切割可能会导致目的基因与运载体反向连接；因此在构建重组质粒时，应选用SalI和HindIII两种限制酶对质粒和含有抗盐基因的DNA进行切割，以保证重组DNA序列的唯一性．
（4）为了确定抗盐烟草是否培育成功，既要用放射性同位素标记的抗盐基因作探针进行分子杂交检测，又要用一定浓度的盐水浇灌方法从个体水平鉴定烟草植株的耐盐性．
故答案为：
（1）引物                 
（2）植物组织培养
（3）SalⅠ和 HindⅢ
（4）抗盐基因   一定浓度的盐水浇灌（或“移栽到盐碱地中”）

点评 本题结合转基因抗盐烟草的培育过程图，考查基因工程、植物组织培养等知识，要求考生识记基因工程的原理、工具及操作步骤，能根据图中限制酶的位置及题干要求选择正确的限制酶；能根据题中信息判断培养基中抗生素的名称；识记植物组织培养过程及条件．