Question

4．通过转基因技术可将人的α-抗胰蛋白酶基因转入牛的基因组中，并让它在牛的乳腺细胞中成功表达．
（1）为使目的基因能够在乳腺细胞中成功表达，可将目的基因与乳腺蛋白基因启动子等调控组件重组，通过显微注射法的方法，导入牛的受精卵中．
（2）为检验目的基因是否已成功导入受体细胞并整合到基因组中，可用被标记的目的基因作为探针，通过DNA分子杂交技术进行检验．
（3）成功导入目的基因的细胞需经过复杂的培养才能发育为转基因个体，此过程涉及的技术主要有动物胚胎培养、胚胎移植等．
（4）要分离牛的血红蛋白，需将经过抗凝处理的牛血经低速短时离心后，再加生理盐水洗涤．在凝胶色谱法分离时，先被洗脱的是大（大或小）分子．

Answer 1

分析 1、基因工程技术的基本步骤：
（1）目的基因的获取：方法有从基因文库中获取、利用PCR技术扩增和人工合成．
（2）基因表达载体的构建：是基因工程的核心步骤，基因表达载体包括目的基因、启动子、终止子和标记基因等．
（3）将目的基因导入受体细胞：根据受体细胞不同，导入的方法也不一样．将目的基因导入植物细胞的方法有农杆菌转化法、基因枪法和花粉管通道法；将目的基因导入动物细胞最有效的方法是显微注射法；将目的基因导入微生物细胞的方法是感受态细胞法．
（4）目的基因的检测与鉴定：分子水平上的检测：①检测转基因生物染色体的DNA是否插入目的基因--DNA分子杂交技术；②检测目的基因是否转录出了mRNA--分子杂交技术；③检测目的基因是否翻译成蛋白质--抗原-抗体杂交技术．个体水平上的鉴定：抗虫鉴定、抗病鉴定、活性鉴定等．
2、凝胶色谱法分离蛋白质的原理是凝胶色谱法是根据相对分子质量的大小来分离蛋白质的有效方法，相对分子质量小的蛋白质容易进入凝胶内部的通道，路程长，移动的速度慢；相对分子质量大的蛋白质不容易进入凝胶内部的通道，路程短，移动的速度快，因此相对分子质量不同的蛋白质得以分离．

解答 解：（1）要使目的基因在乳腺细胞中表达，构建基因表达载体时要将目的基因与乳腺蛋白基因的启动子、标记基因和终止子等调控组件重组在一起，通过显微注射法的方法，导入牛的受精卵中．
（2）为检验目的基因是否已成功导入受体细胞并整合到基因组中，可用被标记的目的基因作为探针，通过DNA分子杂交技术进行检验．
（3）成功导入目的基因的细胞需经过动物胚胎培养和胚胎移植等复杂的培养过程才能发育为转基因个体．
（4）要分离牛的血红蛋白，需将经过抗凝处理的牛血经低速短时离心后，再加生理盐水洗涤．在凝胶色谱法分离时，先被洗脱的是大分子，不容易进入凝胶内部的通道，路程短，移动的速度快．
故答案为：
（1）乳腺蛋白基因启动子 显微注射法 受精卵
（2）被标记的目的基因（单链） DNA分子杂交
（3）动物胚胎培养 胚胎移植
（4）低速短时 大

点评 本题结合转基因动物培育流程图，考查基因工程的原理及技术，要求考生识记基因工程的操作步骤，掌握各步骤中的相关细节，能结合所学的知识准确答题，属于考纲识记和理解层次的考查．