Question

【题目】一种新型融合蛋白蜂毒素一SP94，具有较好的靶向性和毒素活性，为肝癌的靶向性治疗提供了新的思路。它是将蜂毒素与SP94组合序列优化改造成熟，再转换成序列长度为150bp的DNA序列并与pET32a质粒构建表达载体，流程如下图。在大肠杆菌中，重组质粒能表达出新型融合蛋白蜂毒素一SP94。请回答。

pET32a蜂毒素SP94表达载体构建流程图

（1）根据蜂毒素和SP94成熟肽的________序列，先将该序列转换成________，再通过逆转录得到________片段。要获得大量的该片段可以通过_____技术进行扩增。

（2）将目的基因片段和质粒用限制酶_________进行双酶切，回收目的基因片段与质粒的片段，用___________连接，得到含有目的基因的重组质粒，转入经_________处理过的大肠杆菌细胞培养。

（3）为了鉴别受体细胞中是否导入质粒，可用含_____的培养基进行筛选。从筛选出的大肠杆菌中，获取质粒并对其进行酶切鉴定，双酶切后，若测到长度为_________DNA片段，就说明该大肠杆菌中的质粒含有目的基因。

Answer 1

【答案】氨基酸 mRNA Mel-Sp94（蜂毒素-SP94）基因 PCR KpnⅠ和XhoⅠ DNA连接酶 Ca2+处理过 氨苄青霉素 150bp

【解析】

基因工程的基本操作程序

1、目的基因的获取：原核基因采取直接分离获得；真核基因是人工合成，人工合成目的基因的常用方法有反转录法和化学合成法；PCR技术扩增目的基因。

2、基因表达载体的构建

3、将目的基因导入受体细胞

4、目的基因的检测和表达

（1）从图中看出，目的基因的获取是通过人工合成，成熟肽的基本组成单位是氨基酸，所以可以根据其氨基酸序列转换成mRNA序列，通过你转款获得DNA片段（Mel-Sp94（蜂毒素-SP94）基因）。要获得Mel-Sp94（蜂毒素-SP94）基因可以通过PCR技术进行扩增。

（2）比较重组质粒和正常质粒的结构，可以分析出用限制酶KpnⅠ和XhoⅠ切割的目的基因片段和质粒，形成相同的黏性末端，在用DNA连接酶进行连接，转入大肠杆菌之前需要用Ca2+处理受体细胞。

（3）该质粒上有氨苄青霉素作为标记基因，所以可以在含有氨苄青霉素的培养基上进行筛选。从题干中看出目的基因的序列有150bp。