[题目]重组酵母菌乙肝疫苗就是利用基因工程技术使乙肝病毒相关基因在酵母菌内表达并大规模培养.从而提取制成疫苗.(1)下图是获取目的基因的流程:①图中基因组文库 (小于/等于/大于)cDNA文库.②B过程需要的酶是 ,A.C过程中 (可以／不可以)使用同一种探针筛选含目的基因的菌株.③目的基因Ⅰ和Ⅱ除从构建的文库中分离外.还可以分别利用图中和为模� 题目和参考答案——青夏教育精英家教网—

【题目】重组酵母菌乙肝疫苗就是利用基因工程技术使乙肝病毒相关基因在酵母菌内表达并大规模培养，从而提取制成疫苗。

（1）下图是获取目的基因的流程：

①图中基因组文库（小于/等于/大于）cDNA文库。

②B过程需要的酶是；A、C过程中（可以／不可以）使用同一种探针筛选含目的基因的菌株。

③目的基因Ⅰ和Ⅱ除从构建的文库中分离外，还可以分别利用图中和为模板直接进行PCR扩增，该过程中所用酶的显著特点是。

（2）构建基因表达载体时用限制酶切割DNA后可能产生黏性末端，也可能产生平末端，后者需用（E·coil／T4） DNA连接酶通过催化键使目的基因与质粒连接起来。为使目的基因在酵母菌细胞中高效表达，需要把来自cDNA文库的目的基因片段正确插入表达载体的和之间。

（3）在导入表达载体时常用Ca+处理酵母菌，使其成为细胞，再与表达载体于缓冲液中混合，在一定的温度下完成转化。

（4）为了检测目的基因是否成功翻译，可以用技术，若没有出现相应的杂交带，则可能需要用做探针来检测是否转录出mRNA。

【答案】（1）①大于 ②逆转录酶可以 ③DNA cDNA 耐高温

（2）T4 磷酸二酯启动子终止子

（3）感受态

（4）抗原-抗体杂交带标记的目的基因

【解析】

试题分析：（1）①基因组文库包含某种生物所有的基因，而cDNA文库是由mRNA经逆转录形成的基因组成的，由于基因的选择性表达，cDNA文库只包含某种生物部分基因，所以cDNA文库小于基因组文库。

②B过程是逆转录过程，需要逆转录酶．根据碱基互补配对原则，A、C过程可以使用同一种探针筛选含目的基因的菌株。

③目的基因Ⅰ和Ⅱ除从构建的文库中分离外，还可以分别利用图中DNA和cDNA为模板直接进行PCR扩增．PCR技术是在高温条件下进行的，该过程中所用酶要耐高温。

（2）T4DNA连接酶能连接平末端的磷酸二酯键，使目的基因与质粒连接起来．为使目的基因在酵母菌细胞中高效表达，需要把来自cDNA文库的目的基因片段正确插入表达载体的启动子和终止子之间。

（3）将目的基因导入微生物细胞时，常用Ca+处理酵母菌，使其成为易于吸收周围环境中DNA分子的感受态细胞，再与表达载体于缓冲液中混合，在一起的温度下完成转化。

（4）检测目的基因是否整合到受体细胞的染色体上，可通过DNA分子杂交技术进行检测；检测目的基因是否转录形成mRN，可通过分子杂交技术进行检测．这两种技术都需要用带标记的目的基因做探针．检测目的基因是否成功翻译，可以用抗原-抗体杂交技术。

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