【题目】图甲为构建重组质粒过程中的三种备选质粒，其中Ap为氨苄青霉素抗性基因，Tc为四环素抗性基因。图乙为培育转AFPs基因（抗冻基因）番茄的示意图，外源DNA和质粒上均标出了酶切位点及相关抗性基因，请回答下列问题。
（1）图甲中通常选用质粒C构建重组质粒，而不选用质粒A或质粒B,其中不用质粒A原因是____________________________________。
（2）据图乙分析，若需使用插入灭活法筛选并鉴定重组质粒，应优先选用限制酶_____切割目的基因和质粒。
（3）从cDNA文库中获得的目的基因______（填“含有”或“不含有”）启动子和终止子。
（4）在构建基因表达载体过程中常把两个启动子串联在一起形成双启动子，加在目的基因上游。双启动子作用是________________________。
（5）图乙农杆菌中的质粒应含有______，其作用是携带目的基因进入番茄细胞并整合到番茄细胞的染色体DNA。从分子水平检测AFPs基因是否成功表达的方法是_____________。若要获得抗冻能力更强的抗冻番茄，可以对AFPs基因进行改造，最终得到相应的蛋白质，该过程需用到______工程。
（6）为使改造后的AFPs基因能够表达，人工设计质粒D并对它的多个酶切位点进行研究。若用HindⅢ酶或KpnⅠ酶单独切割质粒D，均获得一条长链，若用HindⅢ酶和EcoRⅠ酶同时切割，则获得2个500bp和1个2666bp片段，若用KpnⅠ酶和EcoRⅠ酶同时切割，则获得2个250bp和1个3166bp片段。若以HindⅢ酶切割位点为计算起点，则KpnⅠ酶切割位点与HindⅢ酶切割位点最短长度为_______，EcoRⅠ酶的两个切割位点与HindⅢ切割位点的最短距离为_________。
【答案】质粒A中没有标记基因，质粒B的复制原点中含有HindⅢ酶切位点 BamHⅠ和HindⅢ 不含有 保证目的基因的高效转录（高效表达） T-DNA 抗原-抗体杂交法 蛋白质 750bp 500bp
【解析】
基因工程技术的基本步骤：
（1）目的基因的获取：方法有从基因文库中获取、利用PCR技术扩增和人工合成。
（2）基因表达载体的构建：是基因工程的核心步骤，基因表达载体包括目的基因、启动子、终止子和标记基因等。
（3）将目的基因导入受体细胞：根据受体细胞不同，导入的方法也不一样。将目的基因导入植物细胞的方法有农杆菌转化法、基因枪法和花粉管通道法；将目的基因导入动物细胞最有效的方法是显微注射法；将目的基因导入微生物细胞的方法是感受态细胞法。
（4）目的基因的检测与鉴定：分子水平上的检测：①检测转基因生物染色体的DNA是否插入目的基因--DNA分子杂交技术；②检测目的基因是否转录出了mRNA--分子杂交技术；③检测目的基因是否翻译成蛋白质--抗原-抗体杂交技术。个体水平上的鉴定：抗虫鉴定、抗病鉴定、活性鉴定等。
（1）根据甲图分析，质粒A没有标记基因，质粒B的复制原点中含有限制酶HindⅢ切割位点，可能会破坏复制原点，而质粒C含有多个标记基因和酶切位点，适宜作为基因工程的载体。
（2）图乙中，选用的是质粒C作为基因工程的载体，结合目的基因两端的酶切位点，目的基因和载体可以选择BamHⅠ和HindⅢ同时切割，或者选择EcoRⅠ和HindⅢ同时切割，若需使用插入灭活法筛选并鉴定重组质粒，应优先选用限制酶BamHⅠ ( 会破坏Tc为四环素抗性基因)和HindⅢ切割，可以根据是否对四环素有抗性来筛选。
（3）从cDNA文库中获取的目的基因不含有启动子、终止子、内含子等。
（4）双启动子作用是保证目的基因的高效表达。
（5）农杆菌转化法中的Ti质粒含有的T-DNA可以携带目的基因进入番茄细胞并整台到番茄细胞的染色体DNA上；从分子水平检测AFPs基因是否成功表达的方法是抗原-抗体杂交法；对AFPs基因进行改造，进而达到改造获得抗冻能力更强的抗冻番茄，需要通过蛋白质工程实现。
（6）根据题意分析，若用HindⅢ酶或KpnⅠ酶单独切割质粒D，均获得一条长链，说明该质粒上只含有HindⅢ酶的一个酶切位点和KpnⅠ酶的一个酶切位点；若用HindⅢ酶和EcoRⅠ酶同时切割，则获得2个500b和1个2666bp片段，若用KpnⅠ酶和EcoRⅠ酶同时切割，则获得2个250bp和1个3166bp片段，说明EcoRⅠ酶有2个酶切位点，且两个位点之间的最短距离是500bp ，而KpnⅠ酶的切点在2个EcoRⅠ酶切点之间，距离每个EcoRⅠ酶切点250bp，HindⅢ酶切点距离最近的EcoRⅠ酶切点的最短距离是500bp，距离另一个EcoRⅠ酶切点的距离是500+ 500= 1000bp， 故KpnⅠ酶切割位点与HindⅢ酶切割位点最短长度为250+500= 750bp，EcoRⅠ酶的两个切割位点与HindⅢ切割位点的最短距离为500bp。
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【题目】下图为人体内葡萄糖氧化分解的某一途径，其中①、②、③表示代谢过程，X表示物质。据图分析下列叙述正确的是（ ）
A.①发生在线粒体中B.②会产生少量ATP
C.②和③都会产生[H]D.X代表H2O和CO2
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【题目】生物柴油是一种可再生清洁能源，其应用在一定程度上能够减缓人类对化石燃料的消耗。科学家发现，在微生物 M 产生的脂肪酶的作用下，植物油与甲醇反应能够合成生物柴油（如下图）。
（1）欲分离筛选出能分泌脂肪酶的细菌，应配制以_______________为唯一碳源的培养基，这种培养基从功能上看属于____培养基。
（2）在微生物培养过程中，灭菌与消毒的主要区别是灭菌能够杀死物体内外____。常用____法对玻璃器皿进行灭菌。
（3）若测得稀释倍数为 106 的培养基中的平板上，菌落数的平均值为 254，则每毫升样品中的菌株数是（涂布平板时所用稀释液的体积为 0．1mL）_____。用该方法统计的醋酸菌数目会比活菌的实际值_____（填小或大），原因是____________________________________。
（4）为降低生物柴油生产成本，可利用______________________________技术使脂肪酶能够重复使用。
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【题目】下图1为人体内肝细胞及其内环境示意图，abcd表示不同的体液。下图2为人体生命活动调节模式的示意图，①⑤为神经元，神经末梢及与肌肉或腺体相连接的部分也是一种突触，C和D为细胞，ad为细胞分泌的化学物质。请据图回答：
（1）图1中不属于内环境的是______（填字母），其中毛细血管壁细胞生活内环境是______（填字母），①⑥箭头表示内环境中各种物质的移动方向，其中箭头指向有科学性错误的是______________。
（2）图2中共有突触 ________个，⑤上某处施加一强刺激其膜内电位发生变化是_________。
（3）图2中d若为甲状腺激素，c激素含量变化受____________和___________激素影响，口服c激素，甲状腺激素含量 __________（上升，不变，下降）。
（4） 神经—肌肉突触易受化学因素影响，毒扁豆碱可使乙酰胆碱酯酶失去活性；肉毒杆菌毒素可阻断乙酰胆碱释放；箭毒可与乙酰胆碱受体强力结合，却不能使阳离子通道开放。上述物质中可导致肌肉松弛的有_______________________。
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【题目】下图为人体细胞的部分生命历程，Ⅰ～Ⅳ代表细胞的生命现象，细胞1具有水分减少、代谢减慢的特征，细胞2在适宜条件下可以无限增殖。下列有关叙述错误的是（ ）
A.成体干细胞经过Ⅰ过程形成浆细胞等，不能体现了细胞的全能性
B.Ⅰ～Ⅲ过程中，遗传物质没有发生改变的是Ⅰ过程和Ⅱ过程
C.效应T细胞经过Ⅳ过程使细胞1和细胞2凋亡，属于体液免疫
D.细胞2与正常肝细胞相比，细胞膜上的糖蛋白减少，细胞间黏着性下降
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【题目】为了研究早餐质量对学生血糖和胰岛素水平的影响，某研究小组选取40名健康学生志愿者，按平时早餐习惯分成不进早餐组A、高糖组B、高脂高蛋白组C和均衡营养组D，按组别给予相应早餐，并分别于空腹（餐前）和餐后1、2、3小时取静脉血检测血糖浓度和胰岛素含量，实验期间不食用其他食物，实验结果见图。据图分析，下列有关叙述错误的是（ ）
A.进入血液的氨基酸和脂肪酸等可以促进胰岛素的合成、分泌
B.餐后1h时，胰岛素浓度达到最大值进而导致血糖浓度降至最低
C.餐后B组血糖浓度上升最快，是因为食物中的糖类被直接吸收进入血液
D.若同时检测各组胰高血糖素含量，则其变化曲线的峰值总出现在胰岛素峰值之后
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【题目】下图1为某二倍体植物细胞有丝分裂的某时期示意图，图2、图3为某一动物（2n＝4）减数分裂不同时期的示意图；图4为以上两种生物细胞分裂过程中的染色体数与核DNA数的比值（用H表示）的变化曲线，其中F点代表分裂结束点。请分析回答下列有关问题：
（1）图1细胞处于有丝分裂的______期，其中囊泡来自_____________（填细胞器名称），囊泡与形成新细胞的_______________有关。
（2）图2细胞中含有_____对同源染色体，图3细胞的名称为___________________，位于图4___________段。
（3）图4曲线中D→E发生的变化是__________________________，E点时细胞中含有_______个染色体组。若该曲线表示减数分裂过程中H的变化，则等位基因的分离发生在_________________段。
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【题目】胰岛素可以改善脑神经元的生理功能，其调节机理如图所示，某些糖尿病患者胰岛功能正常，但体内胰岛素对InR的激活能力下降。下列说法不正确的是（ ）
A.正常人的胰岛素受体（InR）的激活，可以促进神经元轴突末梢释放神经递质，改善突触后神经元的生理功能
B.正常人的胰岛素可以抑制神经元死亡，其原因是胰岛素激活InR后，可以抑制神经元的凋亡，并抑制炎症因子释放而导致的神经细胞变性、坏死
C.该患者会导致InR对GLUT转运葡萄糖的直接促进作用减弱，同时对炎症因子的抑制作用降低，从而加强了炎症因子对GLUT的抑制能力
D.与正常人相比，该患者神经元摄取葡萄糖的速率下降，体内胰岛素的含量偏低
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【题目】利用基因工程技术培育转基因抗冻番茄。该过程需要用多种限制酶，如图依次表示EcoR I、Sma I、Nae I三种限制酶的识别序列及切割位点。
请回答：
（1）上述限制酶在特定位点切割DNA，其实质是断开DNA分子每条链中特定部位的两个核苷酸之间的____________，切割后产生了_____________。
（2）利用EcoR I和Nae I酶切得某种鱼的抗冻蛋白基因，可与被EcoR I和Sam I酶切后的质粒接成重组质粒，原因是__________________。
（3）重组质粒可用_____________法导入番茄后，应将转基因番茄植株________________________，以确定其耐寒能力是否提高，若没有提高，根据中心法则分析，可能原因是________________________。
（4）欲检测抗冻蛋白基因是否转录出mRNA，需利用______________________作探针。应用PCR扩增目的基因时，需要在基因组数据库中查询目的基因的_____________，以便合成引物。
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