Question

【题目】牛雄性胚胎中存在特异性H-Y抗原，可在牛早期胚胎培养液中添加H-Y单克隆抗体，筛选胚胎进行移植，以利用乳腺生物反应器进行生物制药。请回答下列问题：

（1）为了大量制备H-Y抗体，可以将H-Y抗原基因导入到大肠杆菌或酵母菌进行表达。与大肠杆菌相比，选择酵母菌获取H-Y的优势是____________。

（2）下图的三个DNA片段上依次表示出了EcoR I、BamH I和Sau3A I三种限制酶的识别序列与切割位点。经BamH I酶切后得到的目的基因可以与载体（不含BamH I识别序列）被________酶切后的产物连接，理由是_________________。

（3）可选择_____期的胚胎，切下少量______细胞进行性别鉴定。待检验的细胞通常需要扩大化培养，当培养液中细胞数量不再增加时，若要使细胞继续增殖，可采用的方法是进行________。

（4）利用H-Y抗体检测性别的原理是__________________。还可用SRY-PCR的方法鉴定性别，在PCR过程中若1个DNA分子扩增了4次，则消耗引物_____个。

Answer 1

【答案】酵母菌是真核生物，具有生物膜系统，能对H-Y抗原基因合成的多肽进行高效加工 Sau3AⅠ 两种酶切割后产生的片段具有相同的黏性末端 囊胚 滋养层 传代培养 抗原抗体特异性结合 30

【解析】

1、基因工程的工具：限制酶和DNA连接酶、运载体。
2、进行胚胎分割时，应选择发育良好、形态正常的桑椹胚或囊胚，对囊胚阶段的胚胎进行分割时要注意将内细胞团均等分割，否则会影响分割后胚胎的恢复和进一步发育。
3、SRY-PCR法，操作的基本程序是：从被测的囊胚中取出几个滋养层细胞，提取DNA；然后用位于Y染色体上的性别决定基因（即SRY基因）的一段碱基作引物，以滋养层细胞的DNA为模板进行PCR扩增；与SRY特异性探针出现阳性反应者，说明其含有Y染色体，为男性。PCR技术依据的原理是DNA复制，每次循环需要经过变性、复性和延伸三步，所用的引物是一段设计的单链DNA或RNA。

（1）酵母菌与大肠杆菌相比，酵母菌属于真核生物，具有生物膜系统，能对H-Y抗原基因合成的多肽进行高效加工，使之具有生物活性。

（2）识图分析可知，限制酶BamH I与限制酶Sau3A I切割后形成的粘性末端能够互补配对，因此经BamH I酶切后得到的目的基因可以与载体（不含BamH I识别序列）被Sau3A I酶切后的产物通过DNA连接酶连接。

（3）根据以上分析可知，可以选择囊胚时期的滋养层的细胞进行性别鉴定。动物细胞培养过程中存在贴壁生长和接触抑制的现象，因此当培养液中细胞数量不再增加时，若要使细胞继续增殖，可采用分到多个培养瓶中进行传代培养的方法。

（4）由于抗体和抗原可以发生特异性结合的原理，利用H-Y抗体进行性别检测，还可用SRY-PCR的方法鉴定性别，在PCR过程中若1个DNA分子扩增了4次，根据pcr扩增的过程可知，则消耗引物：2+4+8+16=30个。