Question

【题目】为扩大可耕地面积，增加粮食产量，沿海滩涂盐碱地的开发利用备受关注。我国科学家应用耐盐碱基因培育出了耐盐碱水稻新品系。请据图回答下列问题：

（1）获取真核生物的基因通常采用人工合成法，通过图示中①方法合成的耐盐碱基因中是不含 __的，如果要将耐盐碱基因和质粒重组，应该在基因两侧的A和B位置除了接上以上两个结构外还需分别加入EcoRIh和________限制酶识别序列，这样设计的优点是避免质粒和目的基因自身环化以及定向连接。

（2）过程②采用PCR技术扩增目的基因时，在PCR反应体系的主要成分中应该包含：扩增缓冲液（含Mg2+）、水，4种脱氧核糖苷酸、模板DNA、TaqDNA聚合酶和引物I和引物Ⅱ，若在该反应体系中，目的基因扩增了4代，则共用了引物I________个。

（3）请画出PstI限制性核酸内切酶切割DNA形成黏性末端的过程________。

（4）图示中将基因表达载体构建完成后没有直接导入农杆菌，而是先将其导入大肠杆菌，目的是

________。

（5）在步骤⑤ ⑥过程中都需用________处理两类细菌。为了确认目的基因通过⑦过程导入植物细胞中后是否成功表达，通常从分子水平进行检测的方法是用________法。

（6）假设该抗盐碱基因D，通过基因工程导入水稻后连接到水稻的一条染色体上，则该水稻进行减数分裂的细胞在联会时有________个D基因。

Answer 1

【答案】（1）启动子和终止子 EcoRⅠ和SmaI或EcoRⅠ和AluI（2）15

（3）

（4）获取大量重组质粒（让目的基因扩增）（5）Ca2+抗原—抗体结合（6） 2

【解析】试题分析：（1）获取真核生物的基因通常采用人工合成法，通过图示中①方法合成的耐盐碱基因中是不含启动子和终止子的，如果要将耐盐碱基因和质粒重组，应该在基因两侧的A和B位置除了接上以上两个结构外还需分别加入EcoRⅠ和SmaI或EcoRⅠ和AluI限制酶识别序列，这样设计的优点是避免质粒和目的基因自身环化以及定向连接。

（2）过程②采用PCR技术扩增目的基因时，在PCR反应体系的主要成分中应该包含：扩增缓冲液（含Mg2+）、水，4种脱氧核糖苷酸、模板DNA、TaqDNA聚合酶和引物I和引物Ⅱ，若在该反应体系中，目的基因扩增了4代，共形成2×（24-1）=30个DNA分子单链，则共用了引物I是30/2=15个。

（3）PstI限制性核酸内切酶切割DNA形成黏性末端的过程图：

（4）图示中将基因表达载体构建完成后没有直接导入农杆菌，而是先将其导入大肠杆菌，目的是获取大量重组质粒或让目的基因扩增。

（5）在步骤⑤⑥过程中都需用Ca2+处理两类细菌。为了确认目的基因通过⑦过程导入植物细胞中后是否成功表达，通常从分子水平进行检测的方法是用抗原—抗体结合法。

（6）假设该抗盐碱基因D，通过基因工程导入水稻后连接到水稻的一条染色体上，则该水稻进行减数分裂的细胞在联会时，由于DNA复制导致有2个D基因。