Question

15．H18杂交瘤细胞在培养过程中的凋亡现象制约着生产能力的提高．通过基因工程可改造H18杂交瘤细胞的抗凋亡能力，相关步骤如下：
①细胞培养：将人肝癌细胞在含10%小牛血清的培养液中培养．一段时间后，用胰蛋白酶处理培养液，漂洗后调整细胞悬液浓度为1×10⁷个•mL^-1．
②免疫小鼠：向小鼠体内注射肝癌细胞悬液0.8mL，以后每隔2周免疫1次，共3次，最后一次免疫后3天，取脾脏制成细胞悬液备用．
③细胞融合及筛选：将脾脏细胞悬液和骨髓瘤细胞悬液在50%PEG作用下进行融合，筛选出能产生抗人肝癌单克隆抗体HAb18的H18杂交瘤细胞．
④改造H18杂交瘤细胞：利用PCR技术获得小鼠的bcl-X_L基因（抗凋亡基因），构建表达载体，通过脂质体法导入H18杂交瘤细胞，再筛选出抗凋亡能力明显提高的H18杂交瘤细胞．
请分析回答：
（1）步骤①肝癌细胞合成培养液中特有的成分是血清（血清、血浆），培养液中还需加入一定量抗生素的目的是防止杂菌污染．
（2）步骤②中，肝癌细胞免疫小鼠需在一定时间内间隔注射3次，其目的是刺激小鼠产生更多的淋巴细胞．
（3）步骤③中，除了用50%PEG促进细胞融合外，常用的生物诱导因素是灭活的病毒，物理诱导方法有电刺激（震荡或离心）（写出一种即可）．步骤④中通过脂质体法能将表达载体导入H18杂交瘤细胞依赖的原理是膜的流动性．
（4）与普通抗肝癌药物相比，用抗人肝癌单克隆抗体HAb18与相应抗癌药物结合制成的“生物导弹”治疗肝癌的主要优点是能将药物定向带到癌细胞所在部位，减少对正常细胞的伤害，减少用药剂量．
（5）乙醇有诱导细胞凋亡的作用．为了建立H18杂交瘤细胞凋亡检测模型，科研人员利用不同浓度的乙醇溶液诱导H18杂交瘤细胞凋亡，其结果如图所示．抗凋亡细胞株的建立与筛选应选择的诱导条件是C（用图中字母表示）．

Answer 1

分析 分析柱形图：该实验的自变量乙醇诱导的时间及乙醇的浓度，因变量是凋亡细胞的比例，根据实验结果可知：乙醇浓度为510mmol/L，诱导6h～7h，细胞凋亡的比例最高．

解答 解：（1）步骤①肝癌细胞培养液中加入小牛血清，目的是补充细胞生长所需的未知营养物质．培养液中还需加入一定量抗生素的目的是：防止杂菌污染．
（2）肝癌细胞免疫小鼠需在一定时间内间隔注射3次，其目的是强免疫，刺激小鼠机体产生更多的淋巴细胞．
（3）步骤③中，除了用50%PEG促进细胞融合外，常用的生物诱导因素是灭活的病毒，物理诱导方法有电刺激（震荡或离心），传统的脂质体是将磷脂、胆固醇或其它脂类的乙醚溶液加入到DNA溶液中，经特殊处理而得到单层或双层的带DNA的脂质体小泡，其可被受体细胞内吞而实现基因转移．步骤④中通过脂质体法将表达载体导入H18杂交瘤细胞的原理是膜的流动性．
（4）与普通抗肝癌药物相比，用抗人肝癌单克隆抗体HAb18与相应抗癌药物结合制成的“生物导弹”治疗肝癌的主要优点是：能将药物定向带到癌细胞所在部位，减少对正常细胞的伤害，减少用药剂量
（5）乙醇有诱导细胞凋亡的作用．为了建立H18杂交瘤细胞凋亡检测模型，科研人员利用不同浓度的乙醇溶液诱导H18杂交瘤细胞凋亡，其结果如图所示．抗凋亡细胞株的建立与筛选应选择的条件是510mmol/L乙醇诱导6h，此时凋亡细胞比例最大，故选：C．
故答案为：
（1）血清（血清、血浆）　防止杂菌污染
（2）刺激小鼠产生更多的淋巴细胞
（3）灭活的病毒（只写避免病毒不得分）　电刺激（震荡或离心）  膜的流动性
（4）能将药物定向带到癌细胞所在部位，减少对正常细胞的伤害，减少用药剂量
（5）C

点评 本题是探究性实验，意在考查考生分析柱形图，获取实验结论的能力，对于动物细胞培养条件的识记和理解能力，难度中等．