Question

【题目】Rag2基因缺失小鼠不能产生成熟的淋巴细胞。科研人员利用胚胎干细胞（ES细胞）对Rag2基因缺失小鼠进行基因治疗。其技术流程如图：

（1）步骤①中，在核移植前应去除卵母细胞的_______。

（2）步骤②中，重组胚胎培养到 ____期时，可从_______分离出ES细胞。

（3）步骤③中，需要构建含有基因Rag2的表达载体。可以利用_______扩增Rag2基因片段。用Hind III和PstI限制酶分别在片段两侧进行酶切获得Rag2基因片段。为将该片段直接连接到表达载体，所选择的表达载体上应具有______和_______的酶切位点。

（4）为检测Rag2基因的表达情况，可提取治疗后小鼠骨髓细胞的_________________，用_______进行杂交实验。

Answer 1

【答案】 细胞核 囊胚 内细胞团 PCR技术 HindⅢ PstI 蛋白质 抗Rag2蛋白的抗体

【解析】试题分析：本题结合图解，综合考查基因工程、细胞工程和胚胎工程的相关知识，要求学生识记基因工程的原理及操作步骤，掌握各操作步骤中需要注意的细节问题；识记核移植的具体过程；识记体外受精的具体过程及早期胚胎发育的过程，能结合所学的知识准确答题。分析题图：图示是利用胚胎干细胞（ES细胞）对Rag2基因缺失小鼠进行基因治疗的过程图解，其中①表示核移植过程，②表示早期胚胎培养过程，③表示采用基因工程技术将目的基因导入受体细胞。

（1）核移植是将体细胞核移植到去核的卵母细胞中，所以实验前要去除卵母细胞的细胞核。

（2）步骤②中，重组胚胎培养到囊胚期，可从其内细胞团分离出ES细胞。

（3）步骤③是将目的基因导入ES细胞，该过程之前需要构建基因表达载体；可以根据基因Rag2的核苷酸序列设计引物，利用PCR技术扩增Rag2基因片段。用HindⅢ和PstI限制酶分别在片段两侧进行酶切获得Rag2基因片段。为将该片段直接连接到表达载体，所选择的表达载体上应具有HindIII和PstI酶的酶切位点。

（4）为检测Rag2基因是否表达，可提取治疗后小鼠骨髓细胞的蛋白质，用抗Rag2蛋白的抗体进行杂交实验。