Question

【题目】三孢布拉氏霉菌具有β－胡萝卜素含量高.易于培养等特点而广泛用于工业化β－胡萝卜素的生产。

下图l是在发酵罐内三孢布拉氏霉菌菌体生物量及β－胡萝卜素产量随时间变化曲线图。图2是样品层析结果及与β一胡萝卜素标准样的比对。请回答下列问题：

（1）用稀释涂布平板法筛选和纯化三孢布拉氏霉菌，配制稀释倍数为101~106的系列稀释液时，需用移液管将1mL菌液移入盛有__mL蒸馏水的试管中。对同一浓度的稀释液，分别用血球计数板计数和稀释涂布平板法计数，若不存在实验误操作，则后者的数量少于前者，其原因是_______。若要所得估计值更接近实际值，除应严格操作.多次重复外，还应该保持待测样品稀释的________________。

（2）不同的材料选用的提取方法不同。用萃取法提取胡萝卜素，但从橘皮中提取精油应采用___法；为了提高出油率，压榨前采用的方法是_________。

（3）图2为萃取的胡萝卜素样品通过纸层析进行鉴定的结果。从图中分析可知，色带__为β－胡萝卜素。出现样品2的结果，可能原因有：①在萃取过程中__（A. 萃取温度高，时间长／B. 干燥温度高，时间长）；②在鉴定过程中__（A. 未经浓缩蒸馏／B. 点样太快，样点小）。

Answer 1

【答案】 9 当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落 比例合适 压榨 将橘皮干燥去水，并用石灰水浸泡 Ⅰ B A

【解析】试题分析：图1中，在发酵罐内利用三孢布拉氏霉发酵生产β-胡萝卜素过程中，β-胡萝卜素产量应该是三孢布拉氏霉处于稳定期时进行连续培养时获得的产量最高。图2表示用纸层析法鉴定胡萝卜素的实验过程。

（1）进行梯度稀释时，需要将1mL菌液移入盛有9ml的无菌水中。使用稀释涂布平板法进行微生物计数时，当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落，而导致结果可能会偏小。若要所得估计值更接近实际值，除应严格操作.多次重复外，还应该保持待测样品稀释的比例合适。

（2）橘皮精油的提取常用压榨法，为了提高出油率，压榨前需将橘皮干燥去水，并用石灰水浸泡，浸泡时间为10h以上，这样压榨时不会滑脱。

（3）据图分析，色素带Ⅰ与标准样色素带一致，故其为β胡萝卜素，出现样品2胡萝卜素含量减少的结果，可能原因是在操作过程中干燥温度高，时间长或未经浓缩蒸馏，导致色素被破坏。萃取温度高，会导致杂质增多；点样太快会出现样品1的现象。