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    11．科学家将鱼抗冻蛋白基因转入番茄，使番茄的耐寒能力大大提高，可以在相对寒冷的环境中生长．质粒上有PstⅠ、SmaⅠ、HindⅢ、AluⅠ等四种限制酶切割位点，如图是转基因抗冻番茄培育过程的示意图（ampr为抗氨苄青霉素基因），其中①～④是转基因抗冻番茄培育过程中的相关步骤，Ⅰ、Ⅱ表示相关结构或细胞．请据图作答：

    （1）利用PCR技术扩增鱼的抗冻蛋白基因，向反应的试管中添加模板DNA、四种脱氧核苷三磷酸（dNTP）、引物和热稳定DNA聚合酶．
    （2）基因工程的核心是构建基因表达载体，进行这项操作时，为了避免目的基因和载体在酶切后产生的末端发生任意连接，在此实例中，应该选用限制酶PstⅠ、SmaⅠ同时对含鱼抗冻蛋白基因的DNA和质粒进行切割，切割后用DNA连接酶 酶处理．
    （3）研究人员通常采用农杆菌转化法将鱼抗冻蛋白基因导入番茄细胞内．在培养基中的添加氨苄青霉素，来筛选已导入含鱼的抗冻蛋白基因的番茄细胞，筛选后，为了进一步确定是否含目的基因，用DNA分子杂交方法检测是否有目的基因．通常采用抗原-抗体杂交技术，在分子水平检测目的基因是否翻译形成了相应的蛋白质，在这项技术中的鱼的抗冻蛋白是抗原．

    分析 分析图解：鱼的抗冻蛋白基因上具有三种限制酶切割位点，PstⅠ酶的切割位点存在于目的基因的两侧，SmaⅠ酶的切割位点存在于目的基因的左侧，而AluⅠ酶的切割位点存在于目的基因的中央，因此不宜选用AluⅠ酶．质粒上有PstⅠ、SmaⅠ、HindⅢ、AluⅠ等四种限制酶切割位点，在选择限制酶时一般选择同种限制酶，以便形成相同的黏性末端．图中①～④分别表示：基因表达载体的构建、目的基因导入受体细胞、脱分化、再分化．

    解答 解：（1）利用PCR技术扩增DNA时所需的条件：引物、模板DNA、原料（4种脱氧核糖核苷酸）、引物和耐热性的DNA聚合酶等．
    （2）基因工程的核心是构建基因表达载体，在构建基因表达载体中，如果目的基因和载体用同一种限制酶切割，获得的黏性末端相同，将会发生目的基因和载体在酶切后产生的末端发生任意连接（或目的基因自连、质粒自连），故应选用不同的限制酶分别对目的基因和载体切割，以获得不同的黏性末端．由于AluⅠ酶的切割位点存在于目的基因的中央，因此不宜选用AluⅠ酶，则应选用PstⅠ和SmaⅠ对含鱼抗冻蛋白基因的DNA、质粒进行切割．切割后用DNA连接酶处理，构建基因表达载体．
    （3）将目的基因导入植物细胞常用农杆菌转化法，在培养基中的添加氨苄青霉素，来筛选已导入含鱼的抗冻蛋白基因的番茄细胞，筛选后，为了进一步确定是否含目的基因，用DNA分子杂交方法检测是否有目的基因．在分子水平检测目的基因是否翻译形成了相应的蛋白质，通常采用抗原-抗体杂交技术，在这项技术中的鱼的抗冻蛋白是抗原．
    故答案为：
    （1）引物   热稳定DNA聚合酶
    （2）构建基因表达载体   PstⅠ、SmaⅠDNA连接酶
    （3）农杆菌转化（或基因枪法等，答案合理即给分）  氨苄青霉素 　DNA分子杂交  抗原-抗体杂交　  抗原

    点评 本题考查了基因工程的工具酶、目的基因导入受体细胞以及利用植物组织培养技术培养转基因植株的相关知识，解答的难点是能够根据目的基因和质粒上的切割位点选择合适的限制酶．

    练习册系列答案
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    1．小华不小心碰到滚烫的开水壶，手会迅速缩回．关于该反射的叙述，正确的是（　　）
    A．反射活动中需要神经递质参与兴奋的传递
    B．突触后膜上会发生“电信号--化学信号--电信号”的转变过程
    C．神经冲动在神经纤维上单向传导，在突触处双向传递
    D．刺激以电信号的形式在整个反射弧中进行传导

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    2．新陈代谢的进行不仅需要酶，而且需要能量．下列关于ATP的描述正确的是（　　）
    A．ATP分子的组成元素是C、H、O、P
    B．动植物形成ATP的途径分别是呼吸作用和光合作用
    C．ATP是生命活动的直接能源物质
    D．线粒体是合成ATP的唯一场所

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    19．大肠杆菌繁衍后代的方式是（　　）
    A．有丝分裂B．减数分裂C．其他分裂D．无丝分裂

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    科目：高中生物 来源： 题型：解答题

    6．洋葱是中学生物实验常用材料之一，如图1所示是与洋葱有关实验的部分步骤，请根据图回答下列问题．

    Ⅰ．③表示观察洋葱根尖细胞有丝分裂时装片制作的压片步骤，该步骤的目的是使细胞分散开来；数染色体数目最好的是中期，此时细胞内染色体、DNA、染色单体数目之比为1：2：2．
    Ⅱ．（1）某同学绘制了细胞分裂期的三个时期模式图，请你在如图2中方框中画出细胞分裂期中所缺时期的模式图．

    （2）动物细胞有丝分裂与上图不同之处主要表现在A、B图．
    （3）图中染色体数与其他各图不同的是图C，请按正确的分裂顺序排列：ADCB．（填字母）
    （4）图C中细胞的染色体条数为8．

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    16．科学家利用生物技术去掉了猪体内的肌肉生长抑制基因，然后把这些“改造过的基因”植入猪的受精卵中，进而发育成肌肉细胞生长不收限制的“肌肉猪”．回答下列问题
    （1）“改造过的基因”导入猪体内之前需要构建基因表达载体，这一过程需要用到的工具有限制酶、DNA连接酶、运载体；基因表达载体的组成成分中，启动子能与RNA聚合酶结合并驱动基因的转录；将目的基因导入猪的受体细胞最有效的方法是显微注射法，该受体细胞通常是受精卵而不是体细胞的原因是受精卵细胞全能性高，细胞全能性容易表现出来．
    （2）利用体外受精的方法获得猪的受精卵时为获得更多的卵母细胞，要对供体母猪注射促性腺激素，使其超数排卵，采集的精子需要经过获能处理，才具备受精能力．
    （3）将具有“改造过的基因”的受精卵细胞培育成“肌肉猪”需要胚胎工程中的早期胚胎培养和胚胎移植等技术，若要一次获得多头完全相同的转基因猪，可采用胚胎分割技术，该项技术必须要选择桑椹胚或囊胚（时期）的胚胎．

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    3．研究生长素的生理作用特点对指导农业生产具有重要意义，请据图回答：
    （1）图乙植物横放一段时间后，根表现出向地生长，茎背地生长，出现这种现象的原因是由于重力作用，生长素在根、茎近地侧的浓度高；生长素促进不同器官生长的最适浓度不同（结合图甲说明）． 此时图乙中 E 部位生长素的量对应图甲中g～k（填字母）的生长素的浓度．
    （2）某果农欲通过扦插培育板栗苗，为促进生根，最好配制浓度为10-10mol•L-1的生长素溶液 浸泡枝条，经一段时间处理后再扦插．
    （3）除上述题目中涉及的生长素生理作用外，生长素还可以促进子房发育成果实，请设置对照实验加以验证（以黄瓜为例，黄瓜花为单性花，分雌花和雄花）．
    ①取甲、乙、丙三组将要开花的黄瓜雌花．
    ②甲组雌花套袋；乙组雌花自然授粉，不套袋；丙组雌花套袋，开花后在雌蕊柱头上涂抹一定浓度的生长素溶液，再套袋．
    ③观察三组果实发育情况．

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    科目：高中生物 来源： 题型：解答题

    20．甲图为植物体内叶肉细胞代谢的示意图，乙图表示温度对该植物光合作用和呼吸作用的影响情况．请据图回答下列问题．

    （1）图甲①过程发生的场所是类囊体的薄膜上．
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    1．下列是有关动物细胞培养的叙述，其中正确的是（　　）
    A．动物细胞培养技术是其他动物细胞工程技术的基础
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    C．动物细胞在原代培养过程中，细胞的遗传物质非常容易发生改变
    D．经过原代培养后，细胞发生分化形成不同的组织和器官

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