Question

【题目】探究如何从土壤中分离自生固氮菌并计数。

实验原理：农田的表层土壤中，自生固氮菌的含量比较多。将用表层土制成的稀泥浆,接种到无氮培养基上进行培养。在这种情况下，只有自生固氮菌才能生长繁殖。

材料用具：农田的表层土壤、无氮培养基、牛肉膏蛋白胨培养基、盛9 mL无菌水的大试管若干、无菌移液管、无菌涂布器、无菌培养皿、盛90 mL无菌水的锥形瓶、酒精灯、恒温箱。

方法步骤：

（1）倒平板。分别将无氮培养基、牛肉膏蛋白胨培养基倒平板，应在_________________________操作。

（2）制备土壤稀释液。取土样10 g加入盛有90 mL无菌水的锥形瓶中，充分摇匀。用无菌移液管吸取上清液 1 mL，转至9 mL无菌水的大试管中，依次稀释到107倍稀释度。为实现无菌操作，试管口和移液管应在离火焰 cm处。

（3）涂布。按照由107～103稀释度的顺序分别吸取0.1 mL进行平板涂布，每个稀释度下，无氮培养基应至少涂布3个平板，牛肉膏蛋白胨培养基涂布 个平板。

（4）培养。放入恒温箱内，在适宜温度条件下培养3～4d。一般每隔24h统计一次，选取菌落数目稳定时的记录作为结果，这样可以防止 。

（5）细菌的计数。选取菌落数在30～300的平板进行计数。如果测试的平均值为50，则每克样品中的菌株数是 。（稀释度是105）

（6）预期结果。相同稀释度下，牛肉膏蛋白胨培养基上的菌落数 （填“多于”或“少于”）无氮培养基上的数目。理由是_____________________________________________________________（2分）。

Answer 1

【答案】

（1）酒精灯火焰旁

（2）1～2

（3）1

（4）因培养时间不足而导致遗漏菌落的数目

（5）5×107

（6）多于 无氮培养基上可以生存和繁殖的只是土壤中的自生固氮菌,而牛肉膏蛋白胨培养基上几乎允许土壤中所有菌类的生存

【解析】

试题分析：

（1）倒平板应在酒精灯火焰旁进行，防止杂菌污染．

（2）为实现无菌操作，试管口和移液管应在离火焰1～2cm处。

（3）按照由101～108倍稀释度的顺序分别吸取0.1mL进行平板涂布，每个稀释度下，无氮培养基应至少涂布3个平板，牛肉膏蛋白胨培养基涂布1个平板做对照．

（4）一般每隔24h统计一次，选取菌落数目稳定时的记录作为结果，这样可以防止因培养时间不足而导致遗漏菌落的数目

（5）当菌落数目稳定时，选取茵落数在30-300的平板进行计数．如果测试的平均值为50，则每克样品中的菌落数是（稀释度是105倍）5×107。

（6）牛肉膏蛋白胨平板上的菌落数多于无氮培养基上的数目，原因是无氮培养基上能生存繁殖的仅是土壤中的固氮菌，而牛肉膏蛋白胨培养基上几乎允许土壤中所有菌类生存．