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    13．GDNF是一种神经营养因子．对损伤的神经细胞具有营养和保护作用．研究人员构建了含GDNF基因的表达载体（如图1所示），并导入到大鼠神经干细胞中，用于干细胞基因治疗的研究．请回答：

    （1）在分离和培养大鼠神经干细胞的过程中，使用胰蛋白酶的目的是使细胞分散开．
    （2）构建含GDNF基因的表达载体时，需选择图1中的XhoⅠ限制酶进行酶切．
    （3）经酶切后的载体和GDNF基因进行连接，连接产物经筛选得到的载体主要有三种：单个载体自连、GDNF基因与载体正向连接、GDNF基因与载体反向连接（如图1所示）为鉴定这3种连接方式，选择HpaⅠ酶和BamHI酶对筛选得到的载体进行双酶切，并对酶切后的DNA片段进行电泳分析，结果如图2所示，图中第②泳道显示所鉴定的载体是正向连接的．
    （4）将正向连接的表达载体导入神经干细胞后，为了检测GDNF基因是否成功表达，可用相应的抗体与提取的蛋白质杂交．当培养的神经干细胞达到一定密度时，需进行传代培养以得到更多数量的细胞，用于神经干细胞移植治疗实验．

    分析 1、基因工程技术的基本步骤：
    （1）目的基因的获取：方法有从基因文库中获取、利用PCR技术扩增和人工合成．
    （2）基因表达载体的构建：是基因工程的核心步骤，基因表达载体包括目的基因、启动子、终止子和标记基因等．
    （3）将目的基因导入受体细胞：根据受体细胞不同，导入的方法也不一样．将目的基因导入植物细胞的方法有农杆菌转化法、基因枪法和花粉管通道法；将目的基因导入动物细胞最有效的方法是显微注射法；将目的基因导入微生物细胞的方法是感受态细胞法．
    （4）目的基因的检测与鉴定：分子水平上的检测：①检测转基因生物染色体的DNA是否插入目的基因--DNA分子杂交技术；②检测目的基因是否转录出了mRNA--分子杂交技术；③检测目的基因是否翻译成蛋白质--抗原-抗体杂交技术．个体水平上的鉴定：抗虫鉴定、抗病鉴定、活性鉴定等．
    2、动物细胞培养的过程：取动物组织块→剪碎组织→用胰蛋白酶处理分散成单个细胞→制成细胞悬液→转入培养液中（原代培养）→放入二氧化碳培养箱培养→贴满瓶壁的细胞用酶分散为单个细胞，制成细胞悬液→转入培养液（传代培养）→放入二氧化碳培养箱培养．

    解答 解：（1）胰蛋白酶的作用是消化组织细胞间的物质，使组织分散成单个细胞．
    （2）根据题意和图示分析可知：由于GDNF基因两边都有XhoⅠ限制酶识别序列，所以构建含GCDNF基因的表达载体时，需选择图1中的XhoⅠ限制酶进行酶切．
    （3）选择HpaⅠ酶和BamⅡ酶对筛选得到的载体进行双酶切，并对酶切后的DNA片透进行电泳分析，结果如图2所示，由于GDNF基因中有BamⅡ酶识别序列，所以图中第②泳道显示所鉴定的载体是正向连接的．
    （4）为了检测GDNF基因是否成功表达，可利用抗原-抗体杂交技术，用相应的抗体与提取的蛋白质杂交，当培养的神经干细胞达到一定密度时，需进行传代培养以得到更多数量的细胞，用于细胞干细胞移植治疗实验．
    故答案为：
    （1）使细胞分散开
    （2）XhoⅠ
    （3）②
    （4）抗体 传代

    点评 本题考查基因工程、动物细胞培养的相关知识，要求考生识记基因工程的原理、操作工具及操作步骤等，掌握各步骤中的相关细节，能结合所学的知识准确判断各选项．

    练习册系列答案
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    A．治疗性克隆不以个体的出生为目的
    B．胚胎干细胞只能取自于囊胚或桑椹胚
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    1．图所示为测定A、B两个神经元之间兴奋传递的实验装置（电流表的两极搭接于神经纤维膜表面），图中ab=cd．若用适度刺激分别刺激b、c处，会发生的现象是（　　）
    A．刺激b点，B神经元上膜电位由“外负内正”迅速变为“外正内负”
    B．刺激c点，A神经元上电位由“外正内负”迅速变为“外负内正”
    C．刺激b点，灵敏电流计发生2次方向相反的偏转
    D．刺激c点，灵敏电流计发生2次方向相同的偏转

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    A．生态系统中物质循环发生在种群和无机环境之间
    B．生态系统的信息传递是生态系统实现反馈调节的前提
    C．生态系统中能量流动是物质循环的动力
    D．生态系统中的能量最终以热能形式散失到环境中

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    18．将3根离体神经纤维（枪乌贼的巨轴突）分别放置于盛有海水（甲）等渗KCl溶液（乙）等渗葡萄糖溶液（丙）3个培养皿中．若都给予适宜的刺激，培养皿中的神经纤维可以产生神经冲动的是（　　）
    A．甲B．乙C．丙D．均可以

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    5．不同生物不同细胞的细胞周期的持续时间不同，下表为23-24℃时测得的四种高等植物分生组织的细胞周期的持续时间．下列有关叙述中正确的是（　　）
    植物细胞周期的时间（h）
    分裂间期a分裂期b全周期
    111.72.514.2
    212.81.214.0
    310.42.312.7
    416.51.918.4
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    2．在生态系统中的物质可以循环利用，如图表示生物圈中碳元素的循环过程，下列有关叙述正确的是（　　）
    A．A是分解者、B是生产者，③过程代表绿色植物的光合作用
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