Question

4．手足口病是五岁以下儿童中常见的传染性疾病．柯萨奇病毒A16型（CA16）和肠道病毒71型（EV71）是引起手足口病的两个最主要的病原体，感染EV71或CA16都有可能引起严重的神经系统并发症甚至导致死亡．可利用生物技术手段制备手足口病疫苗，请根据所学知识分析回答下列相关问题：
（1）为获得大量手足口病的抗体，可将经手足口病原体免疫过的B淋巴细胞与骨髓瘤细胞进行细胞融合，最常用的诱导融合手段是灭活的病毒．至少经过两次筛选后获得的杂交瘤细胞，可通过体外细胞培养和小鼠腹水提取（体内培养）生产大量抗体．这种方法获得的抗体具有灵敏度高、特异性强和可大量制备的优点．若得到的抗体不易保存，可通过蛋白质工程对天然抗体进行改造，使其满足人类需要．
（2）科学家研制手足口病基因疫苗的基本过程为：获取病毒某基因后，与运载体结合形成的表达载体还必须具备启动子、终止子和标记基因等；注入机体基因表达后，产生病毒的抗原（填“抗体”或“抗原”），从而使机体对该病毒产生免疫．

Answer 1

分析 1、单克隆抗体的制备过程：首先用特定抗原注射小鼠体内，使其发生免疫，小鼠体内产生具有免疫能力的B淋巴细胞．利用动物细胞融合技术将B淋巴细胞和骨髓瘤细胞融合，在经过两次筛选：①筛选得到杂交瘤细胞（去掉未杂交的细胞以及自身融合的细胞）②筛选出能够产生特异性抗体的细胞群．两次抗体检测：专一抗体检验阳性，获得能产生特异性抗体、又能大量增殖杂交瘤细胞．最后从培养液或小鼠腹水中提取单克隆抗体．
2、基因表达载体的组成：目的基因+启动子+终止子+标记基因
①启动子：是一段有特殊结构的DNA片段，位于基因的首端，是RNA聚合酶识别和结合的部位，能驱动基因转录出mRNA，最终获得所需的蛋白质．
②终止子：也是一段有特殊结构的DNA片段，位于基因的尾端．
③标记基因的作用：是为了鉴定受体细胞中是否含有目的基因，从而将含有目的基因的细胞筛选出来．常用的标记基因是抗生素基因．

解答 解：（1）制备单克隆抗体需利用B淋巴细胞和骨髓瘤细胞进行融合．诱导动物细胞融合常用的技术手段为利用灭活的病毒．融合之后需经过至少两次筛选，获得能分泌特异性抗体杂交瘤细胞．获得的杂交瘤细胞可通过体外细胞培养或小鼠腹水培养进行扩大培养，获得大量抗体．单克隆抗体具有特异性强、灵敏度高、可大量制备的特点．对蛋白质进行改造属于蛋白质工程．
（2）获取的目的基因可以与运载体结合构建形成基因表达载体．构建成功的基因表达载体除目的基因外还必须含有启动子、终止子、标记基因．导入的目的基因表达产生的蛋白质引起机体的免疫反应，所以其表达产物应是抗体．
故答案为：
（1）经手足口病原体免疫过的B淋巴   骨髓瘤   灭活的病毒   两   体外细胞培养   小鼠腹水提取（体内培养）     灵敏度高   特异性强    可大量制备（顺序可颠倒）   蛋白质
（2）运载体    启动子   终止子   标记基因   抗原

点评 本题主要考查单克隆抗体的制备过程、基因工程和蛋白质工程，意在考查考生的识记能力和理解所学知识要点，把握知识间内在联系，形成知识网络结构的能力；能运用所学知识，准确判断问题的能力，属于考纲识记和理解层次的考查．