Question

【题目】pBV220载体是我国预防医学科学院病毒研究所自行构建并广泛应用的大肠杆菌温控载体，大小为3 666 bp（bp表示碱基对），其结构如下图所示。图中PRPL是启动子，rrB是基因转录终止信号，Ampr是氨苄抗性基因，ori是质粒复制起点，EcoR Ⅰ、Hind Ⅲ等为各种限制性内切酶。请据图回答下列有关问题：

（1）基因工程的核心步骤是____________________________________。

（2）从图中可看出，pBV220作为运载体具备的条件有________、________。

（3）该质粒可被A、B、C三种限制性内切酶同时切割。单独A切割得一条长链，单独B切也得一条长链，A和C同时切割得2个500 bp和1个2 666 bp片段，B和C同时切割得2个250 bp和1个3 166 bp片段。若以A的切割位点为计算起点，则B的切割位点与A点最短长度为________，C的两个切割位点与A点的最短距离分别为________、________

（4）PR和PL都是启动子，pBV220载体构建过程中把两个启动子串联在一起，形成了双启动子，双启动子的作用可能是________。温控基因CIts857编码对温度敏感的CIts蛋白，CIts在30℃时具有抑制启动子的活性，在42℃时失活。促进工程菌目的基因表达的诱导温度为________。

Answer 1

【答案】 构建目的基因的表达载体 多个限制性内切酶的切割位点 标记基因 750 bp 500 bp 1 000 bp 保证目的基因的高水平表达（高效转录） 42℃

【解析】本题考查基因工程，要求考生理解基因工程的操作程序，明确运载体必需具备的条件，能根据题意计算质粒中的不同的酶切位点的位置关系，进而分析、解答问题。

（1）基因工程的核心步骤是构建目的基因的表达载体。

（2）从图中可看出，pBV220作为运载体具备的条件有多个限制性内切酶的切割位点（便于目的基因的插入）、具有标记基因即氨苄抗性基因Ampr（便于鉴定和筛选含有目的基因的受体细胞）。

（3）单独A切割得一条长链，单独B切也得一条长链，A和C同时切割得2个500bp和1个2666bp片段，B和C同时切割得2个250bp和1个3166bp片段，这说明该质粒上有一个A酶切割位点、一个B酶切割位点、2个C酶切割位点；A和C同时切割得2个500bp和1个2666bp片段，说明A和C酶的一个切点之间的长度为500bp；B和C同时切割得2个250bp和1个3166bp片段，说明B和C酶的一个切点之间的长度为250bp；若以A的切割位点为计算起点，则B的切割位点与A点最短长度为500+250=750bp，C的两个切割位点与A点的最距离分别为500bp、1000bp。

（4）PR和PL都是启动子，pBV220载体构建过程中把两个启动子串联在一起，形成了双启动子，双启动子的作用可能是保证目的基因的高水平表达（高效转录）；温控基因CIts857编码对温度敏感的CIts蛋白，CIts在30℃时具有抑制启动子的活性，在42℃时失活，因此要促进工程菌目的基因表达就要使CIts蛋白失活，即促进工程菌目的基因表达的诱导温度为42℃。