Question

研究人员利用基因工程技术对肺癌的治疗进行了大量研究，肺部细胞中的let-7基因表达减弱，癌基因RAS表达增强，会引发肺癌。研究人员利用基因工程技术将let-7基因导入肺癌细胞实现表达，发现肺癌细胞的增殖受到抑制。该基因工程技术基本流程如图所示，据图回答

1.在基因工程中通常选择细菌质粒作为载体，原因是                         ；如果某质粒由100 0个脱氧核苷酸组成，脱氧核苷酸平均分子量为a,则该质粒的质量为       。
2.图甲中在构建重组载体时，酶切目的基因和酶切质粒时，所用的限制酶可以不同，但是产生的粘性末端必须是               。
3.图甲中在将酶切后的目的基因导入到酶切后的质粒上时需要的酶是             ， 图乙中let-7基因转录过程需要的酶是   ，这 两种酶作用的化学键都是         。
4.EcoR I限制酶只能识别序列一GAATTC一，并只能在G与A之间切割。若在某目的基因的两侧各有1个EcoR I的切点，请画出目的基因两侧被限制酶EcoR I切割后所形成的黏性末端。                      
5.原代培养是是指直接从机体取下细胞、组织和器官后立即进行培养。原代培养随着培养时间的延长和细胞不断分裂，空间因素和营养因素会限制其进一步生长。此时就需要将培养物分割成小的部分（组织细胞分散开），重新接种到另外的培养器皿内再进行培养，这个过程就称为传代或者再培养。图甲中进行传代培养操作时，需要用　　 　　酶处理贴附在原代培养培养皿壁上的细胞，以利于传代培养。
6.研究发现，let-7基因能影响RAS基因的表达，其影响机理如图乙所示。从分子水平的角度分析，其作用机理是　　                              　   　。
7.下图所示pBR322是目前常用的人工质粒载体。如果将BamHI处理后的pBR322质粒与用BgIⅡ处理得到的目的基因进行重组，并将重组质粒导入原本无amp^R和tet^R 的大肠杆菌进行培养。为了检测重组质粒是否成功导入大肠杆菌，现将上述大肠杆菌在含氨苄青霉素的培养基上培养，得到如图二的菌落。再将灭菌绒布按到培养基上，使绒布面沾上菌落，然后将绒布按到含四环素的培养基上培养，得到如图三的结果(空圈表示与图二对照无菌落的位置)。与图三空圈相对应的图二中的菌落表现型是___      _____ ，图三结果显示，多数大肠杆菌内导入的是___           __。

Answer 1

1.质粒进入受体细胞（宿主细胞）能稳妥保存并复制自己（有多个酶切位点，有标记基因）    1000a—18000
2.互补
3.DNA连接酶   RNA聚合酶   磷酸二酯键
4. 

5.（胰）蛋白酶
6.let-7转录的无翻译功能的miRNA能与RAS mRNA特异性结合，抑制RAS蛋白质的合成
7.抗氨苄青霉素但不抗四环素    Pbr322Z质粒    （每格1分，共11分）

解析试题分析：细菌质粒作为载体的原因是：１、能保存并复制自己２、有多个酶切位点３、有标记基因、４对宿主细胞无毒害作用；质粒的质量＝脱氧核苷酸的分子质量数－脱水分子质量数＝１０００ａ－１８*１０００；在构建重组的载体时，产生黏性末端必须得互补，才能连起来；把两个基因缝合起来用ＤＮＡ连接酶，转录时用ＲＮＡ聚合酶，这两种酶作用的部分是磷酸二酯键；传代培养过程中，使细胞间分散开来需要用到胰蛋白酶；let-7转录的无翻译功能的miRNA能与RAS mRNA特异性结合，抑制RAS蛋白质的合成；菌落表现型是抗氨苄青霉素但不抗四环素，多数大肠杆菌内导入的是Pbr322Z质粒。
考点：本题考查基因工程、细胞工程的相关知识，意在考查考生能运用所学知识与观点，通过比较、分析与综合等方法对某些生物学问题进行解释、推理，做出合理的判断或得出正确的结论的能力。