Question

4．人和哺乳动物的尿中含有尿素，环境中大量尿素的存在会造成污染．土壤中有些细菌含有脲酶，可通过降解尿素作为其生长的氮源．某研究小组对土壤中的这类细菌进行分离，用以回收氮元素，同时净化环境．请回答下列相关问题：
（1）将样液进行一系列的梯度稀释，然后采用稀释涂布平板法接种培养．在稀释土壤溶液的过程中，每一步都要在酒精灯火焰旁进行操作．接种后的平板应倒置放于37℃的恒温箱中培养．
（2）用以尿素为唯一氮源的培养基可分离获得能分泌脲酶的细菌，从功能上划分，该培养基属于选择培养基．若培养基中存在能分泌脲酶的细菌，则其菌落周围会出现红色环带，这是由于尿素被分解产生氨，使pH升高，培养基中加入的酚红指示剂产生颜色变化，从而证明这一菌株可以尿素为氮源．变色区域越大，表明该菌株利用尿素的能力越强．

Answer 1

分析 无菌操作要求在整个实验过程中操作都在酒精灯火焰附近进行，以避免周围微生物的污染．微生物接种的方法很多，最常用的是平板划线法和稀释涂布平板法．稀释涂布平板法则是将菌液进行一系列的梯度稀释，然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面，进行培养．

解答 解：（1）采用稀释涂布平板法将样液进行一系列的梯度稀释，然后接种培养；为避免杂菌污染，操作要在酒精灯火焰旁操作，为防止水蒸气在皿盖上凝结会产生水滴，培养皿需要倒置在恒温培养箱中培养．
（2）筛选和分离尿素分解菌时，需要使用以尿素为唯一氮源的选择培养基．在培养基中加入酚红指示剂，尿素分解菌产生的脲酶能够将尿素分解成氨可使PH呈碱性而出现红色环带，变色区域越大，说明其分解能力越强．
故答案为：
（1）稀释涂布平板　   酒精灯火焰　   倒置
（2）以尿素为唯一氮源　  选择　  红色环带　  氨　  越强

点评 本题以脲酶为素材，考查微生物的分离和培养、以氮素为氮源测定能生长的细菌的数量，要求考生识记无菌技术，特别是实验室常用的消毒和灭菌方法；掌握培养基的种类，能应用相应的培养基对土壤中的含有脲酶的细菌进行分离．