Question

18．请回答下列有关胚胎工程和基因工程等方面的问题：
（1）哺乳动物核移植可以分为胚胎细胞核移植和体细胞核移植．利用体细胞进行核移植技术的难度明显高于利用胚胎细胞讲行核移植的原因是体细胞分化程度高，不容易恢复全能性．在哺乳动物的核移植实验中，一般通过_电脉冲（或电刺激）（物理方法）将受体细胞激活，使其进行细胞分裂并发育，当胚胎发育到桑椹胚或囊胚阶段时，将胚胎植入同种的、生理状态相同的另一雌性（代孕）动物体内．为获得多只与该哺乳动物遗传物质相同的个体，还可使用胚胎分割技术．
（2）在“试管牛”的培育过程中，要使精子和卵母细胞在体外成功结合，需要对精子进行获能处理．该处理有培养法和化学诱导法两种方法．另外，培养的卵母细胞需要发育至MⅡ中期，该时期在显微镜下可观察到次级卵母细胞和第一极体．
（3）在基因工程中若要使获得的转基因牛分泌的乳汁中含有人抗凝血酶Ⅲ蛋白，则所构建的基因表达载体必须包括：某种牛乳腺分泌蛋白基因的启动子、人抗凝血酶Ⅲ蛋白基因（或目的基因）、终止子、标记基因和复制原点等．目前常用的措施是将该基因表达载体导入牛的受精卵（填“受精卵”或“乳腺细胞”）．若要检测牛奶中是否含有抗凝血酶Ⅲ蛋白，可采用抗原-抗体杂交技术．

Answer 1

分析 1、基因工程技术的基本步骤：
（1）目的基因的获取：方法有从基因文库中获取、利用PCR技术扩增和人工合成．
（2）基因表达载体的构建：是基因工程的核心步骤，基因表达载体包括目的基因、启动子、终止子和标记基因等．（3）将目的基因导入受体细胞：根据受体细胞不同，导入的方法也不一样．将目的基因导入植物细胞的方法有农杆菌转化法、基因枪法和花粉管通道法；将目的基因导入动物细胞最有效的方法是显微注射法；将目的基因导入微生物细胞的方法是感受态细胞法．
（4）目的基因的检测与鉴定：分子水平上的检测：①检测转基因生物染色体的DNA是否插入目的基因--DNA分子杂交技术；②检测目的基因是否转录出了mRNA--分子杂交技术；③检测目的基因是否翻译成蛋白质--抗原-抗体杂交技术．个体水平上的鉴定：抗虫鉴定、抗病鉴定、活性鉴定等．
2、受精前的准备阶段
（1）准备阶段1-精子获能．刚刚排出的精子，不能立即与卵子受精，必须在雌性动物生殖道发生相应的生理变化后，才能获得受精能力．
（2）准备阶段2-卵子的准备，动物排出的可能是初级卵母细胞也可能是次级卵母细胞，都要在输卵管内进一步成熟，达到减数第二次分裂中期时，才具备与精子受精的能力．

解答 解：（1）由于体细胞分化程度高，不容易恢复全能性，因此利用体细胞进行核移植技术的难度明显高于利用胚胎细胞进行核移植．在哺乳动物的核移植实验中，一般通过电脉冲（或电刺激）将受体细胞激活，使其进行细胞分裂并发育；当胚胎发育到桑葚胚或囊胚阶段时，将胚胎植入另一雌性（代孕）动物体内．为获得多只与该哺乳动物遗传物质相同的个体，还可使用胚胎分割技术．
（2）在“试管牛”的培育过程中，要使精子和卵母细胞在体外成功结合，需要对精子进行获能处理有培养法和化学诱导法两种方法．另外，培养的卵母细胞需要发育至MⅡ中期，该时期在显微镜下可观察到次级卵母细胞和第一极体．
（3）在基因工程中若要使获得的转基因牛分泌的乳汁中含有人抗凝血酶Ⅲ蛋白，则所构建的基因表达载体必须包括：某种牛乳腺分泌蛋白基因及其启动子、人抗凝血酶Ⅲ蛋白基因（或目的基因）、终止子、标记基因和复制原点等．培育转基因动物时，常以受精卵为受体细胞，且将目的基因导入动物细胞最有效的方法是显微注射法．若要检测牛奶中是否含有抗凝血酶Ⅲ蛋白，可采用抗原-抗体杂交技术．
故答案为：
（1）体细胞分化程度高，不容易恢复全能性   电脉冲（或电刺激）  胚胎分割
（2）培养法和化学诱导法   MⅡ中期
（3）人抗凝血酶Ⅲ蛋白基因（或目的基因）   受精卵  抗原-抗体杂交

点评 本题考查基因工程、细胞工程和胚胎工程的相关知识，要求考生识记核移植的具体过程；胚胎移植的基本程序；识记基因工程的具体操作步骤，掌握各步骤中的细节，能结合所学的知识准确答题．