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    【题目】利用生物工程技术，可从转基因奶山羊乳汁中分离获得人凝血因子IV，用于血友病的治疗。请回答下列问题：

    （1）根据凝血因子IV基因上游和下游的碱基序列，可用____技术获取并扩增基因。构建该基因表达载体时，所用到的工具酶是_____，该基因表达载体中，凝血因子Ⅳ基因的上游和下游分别是________。

    （2）将目的基因表达载体导入奶山羊受精卵的常用方法是______。受体细胞选用受精卵的优点是细胞大易操作、营养物质含量高和_______。

    （3）在体外胚胎培养时，应选用囊胚的_____进行DNA分析，用于选择雌性胚胎。此期的胚胎也适于胚胎分割移植，此技术的优点是________。

    （4）人凝血因子IV是一种胞外酶，该蛋白的加工是在______等细胞器上进行的。人凝血因子IV只在乳腺细胞合成的原因是___________________。

    【答案】

    （1）PCR 限制性核酸内切酶和DNA连接酶 启动子和终止子

    （2）显微注射法 细胞全能性高

    （3）滋养层细胞 充分发挥雌性动物的生殖潜力（快速大量繁殖）（1分）

    （4）内质网、高尔基体（1分） 基因的选择性表达（1分）

    【解析】

    试题分析：

    （1）可利用 PCR 技术扩增目的基因；构建该基因表达载体时，通常用同种限制酶切割含有目的基因的DNA和运载体，再用DNA连接酶将目的基因与切开的运载体连接起来，因此所用到的工具酶是限制酶和DNA连接酶。凝血因子Ⅳ基因为目的基因，在基因表达载体中，启动子位于目的基因的首端，终止子位于目的基因的尾端。

    （2）显微注射技术是将目的基因导入动物细胞常用的方法；受精卵的优点是：细胞全能性最高，细胞大易操作、营养物质含量高。

    （3）在体外胚胎培养时，可取囊胚的滋养层细胞做DNA分析性别鉴定。胚胎分割有利于提高胚胎的利用率，胚胎移植可以充分发挥雌性优良个体的繁殖潜力。

    （4）分泌蛋白是在内质网、高尔基体等细胞器上加工的；基因的选择性表达使人凝血因子Ⅳ只在乳腺细胞合成。

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