回答下列关于基因工程的问题。
草甘膦是一种广谱除草剂，其除草机制是抑制植物体内EPSPS酶的合成，最终导致植物死亡。但是，它的使用有时也会影响到植物的正常生长。目前，已发现可以从一种抗草甘膦的大肠杆菌突变株中分离出EPSPS基因，若将该基因转入植物细胞内，从而获得的转基因植物就能耐受高浓度的草甘膦。
下图A-F表示6株植物，其中，植物A和D对草甘膦敏感，B和E对草甘膦天然具有抗性，C和F则经过了转基因处理，但是是否成功还未知。图1和2分别表示两段DNA序列。表格中1-4分别表示4种限制性核酸内切酶的酶切位点。据图回答下列问题：
.
（1）若A-C浇清水，D-F浇的水中含有草甘膦，上述植物中，肯定能健康成长的是_________。
（2）若要从大肠杆菌中筛选出含EPSPS基因的突变菌株甲，在大肠杆菌培养基中还必须加入 ___________。
（3）假设位于EPSPS基因两侧的DNA序列均如图I所示，则应选择表中酶__________进行酶切；若位于EPSPS基因两侧的DNA序列分别如图I和II所示，则应选择表中酶__________ 进行酶切。
（4）假设大肠杆菌突变菌株甲中EPSPS基因的右侧序列如图II所示，请在方框内画出经酶切后产生的两个末端的碱基序列。（2分）
（5）假设EPSPS基因已被成功转移到植物F中，但植物F仍没有表现出抗性，分析可能的原因_______________________________________________________________。
下图甲是某目的基因（4.0kb，1kb=1000对碱基）与大肠杆菌pUC18质粒（2.7kb）重组的示意图。图中Ap′是抗氨苄青霉素基因，lacZ是显色基因，其上的EcoRI识别位点位于目的基因插入位点的右侧，其控制合成的物质能使菌落呈现蓝色。（图乙中深色圆点即为蓝色菌落）
（6）图乙的培养基中含有氨苄青霉素，请判断图乙中所出现的白色和蓝色两种菌落中，何种会含有重组质粒。___________。
（7）现用EcoRI酶切质粒，酶切后进行电泳观察，若出现长度为_________kb和 kb的片段，则可以判断该质粒已与目的基因重组成功。（重组质粒上目的基因的插入位点与EcoRI的识别位点之间的碱基对忽略不计）
（10分）
（1）ABCE （2）草甘膦 （3）2 2和3
（4）
（画出完整给2分，要求画出化学键、碱基序列完整且正确）
（5）目的基因 （6）白色 （7）3kb和3.7kb。
解析试题分析：（1）根据题意分析可知：植物A和D对草甘膦敏感，B和E对草甘膦天然具有抗性，C和F则经过了转基因处理，所以A-C浇清水，都能健康成长。F虽经过了转基因处理，但是是否成功还未知。所以D-F浇的水中含有草甘膦，D肯定不能健康成长，E肯定能健康成长，F未知。因此肯定能健康成长的是ABCE。（2）要从大肠杆菌中筛选出含EPSPS基因的突变菌株，则必须要用含草甘膦的培养基培养大肠杆菌。（3）因为限制酶具有特异性识别的能力，对照图I所示，所以应选择表中酶2进行酶切。对照图I和II所示，则应选择表中酶2和3同时进行酶切。（4）画出完整的DNA片段，要有两个粘性末端，化学键、碱基序列完整且正确。（5）假设EPSPS基因已被成功转移到植物F中，说明F中已含有EPSPS基因，如果仍没有表现出抗性，则说明EPSPS基因在受体细胞中没有表达，或表达的酶没有活性。（6）白色，因为EcoRI将lacZ显色基因破坏了。（7）3kb和3.7kb。
考点：基因工程
点评：本题重点考查基因工程的有关知识，要求学生掌握基因工程的操作步骤及在生产实践中的运用，考查学生的识图能力和分析问题的能力。难度中等。
科目：高中生物 来源： 题型：
回答下列关于基因工程的问题
下图1是培育表达人乳铁蛋白的乳腺生物反应器的技术路线，表中列出了几种限制酶识别序列及其切割位点，图2、图3中箭头表示相关限制酶的酶切位点。
（1）若对图2中质粒进行改造，插入的SmaⅠ酶切位点越多，质粒的热稳定性如何变化，为什么？
（2）图中将人乳铁蛋白基因插入质粒，可以只用EcoR I同时酶切质粒和人乳铁蛋白基因，也可以使用BamH Ⅰ和Hind Ⅲ两种限制酶同时酶切质粒和人乳铁蛋白基因，后一个方法的优点在于可以防止 。
（3）为了获取重组质粒，将切割后的质粒与目的基因片段混合，并加入 酶。重组质粒中抗生素抗性基因的作用是为了 。
（4）图1过程①可采用的操作方法是 ，过程②可采用的生物技术是 。过程③可采用的生物技术是 。
（5）分别从分子水平简述雌性转基因牛分泌人乳铁蛋白的过程是_______________。
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科目：高中生物 来源： 题型：阅读理解
回答下列关于基因工程的问题：
如图是将人的生长激素基因导入细菌B细胞内制造“工程菌”示意图，所用载体为质粒A。已知细菌B细胞内不含质粒A，也不含质粒A上的基因，质粒A导入细菌B后，其上的基因能得到表达，根据图示所给信息回答下列问题：
(1)将目的基因和质粒结合形成重组质粒时，用同一种限制性内切酶分别切割目的基因和质粒，露出相同的黏性末端，将切下的目的基因片段插入质粒的切口处再加入适量的 ，使质粒与目的基因结合成重组质粒。
(2)目前把重组质粒导入细菌细胞时，效率还不高；导入完成后得到的细菌，实际上有的根本没有导入质粒；有的导入的是普通质粒A；只有少数导入的是重组质粒。此处可以通过如下步骤来鉴别得到的细菌是否导入了质粒A或重组质粒：
将得到的细菌涂抹在一个含有 的培养基上，能够生长的就是导入质粒A或重组质粒的，反之则没有。此过程中体现了质粒作为运载体必须具备的两个条件 ； 。
(3)若进一步鉴定证明细菌中导入的是普通质粒A还是重组质粒，将得到的细菌涂抹在一个含有
的培养基上培养，若细菌 ，则导入的是普通质粒。如果利用DNA分子杂交原理来证明此过程，应该用 作为探针。
（4）使体外重组的DNA分子转移到受体细胞内，主要是借鉴 的途径。
(5) 目的基因表达成功后，“工程菌”明显不同于细菌D。从变异的来源看，此变异属于
。导入细菌B细胞中的目的基因成功表达的标志是什么? 。
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科目：高中生物 来源：河北省衡水中学2009—2010学年度第二学期期中考试高二生物试卷 题型：综合题
回答下列关于基因工程的问题：
如图是将人的生长激素基因导入细菌B细胞内制造“工程菌”示意图，所用载体为质粒A。已知细菌B细胞内不含质粒A，也不含质粒A上的基因，质粒A导入细菌B后，其上的基因能得到表达，根据图示所给信息回答下列问题：
(1)将目的基因和质粒结合形成重组质粒时，用同一种限制性内切酶分别切割目的基因和质粒，露出相同的黏性末端，将切下的目的基因片段插入质粒的切口处再加入适量的 ，使质粒与目的基因结合成重组质粒。
(2)目前把重组质粒导入细菌细胞时，效率还不高；导入完成后得到的细菌，实际上有的根本没有导入质粒；有的导入的是普通质粒A；只有少数导入的是重组质粒。此处可以通过如下步骤来鉴别得到的细菌是否导入了质粒A或重组质粒：
将得到的细菌涂抹在一个含有 的培养基上，能够生长的就是导入质粒A或重组质粒的，反之则没有。此过程中体现了质粒作为运载体必须具备的两个条件 ； 。
(3)若进一步鉴定证明细菌中导入的是普通质粒A还是重组质粒，将得到的细菌涂抹在一个含有
的培养基上培养，若细菌 ，则导入的是普通质粒。如果利用DNA分子杂交原理来证明此过程，应该用 作为探针。
（4）使体外重组的DNA分子转移到受体细胞内，主要是借鉴 的途径。
(5)目的基因表达成功后，“工程菌”明显不同于细菌D。从变异的来源看，此变异属于
。导入细菌B细胞中的目的基因成功表达的标志是什么? 。
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科目：高中生物 来源：2012-2013学年江苏省高三最后一次模拟考试生物试卷 题型：综合题
回答下列关于基因工程的问题。
草甘膦是一种广谱除草剂，其除草机制是抑制植物体内EPSPS酶的合成，最终导致植物死亡。但是，它的使用有时也会影响到植物的正常生长。目前，已发现可以从一种抗草甘膦的大肠杆菌突变株中分离出EPSPS基因，若将该基因转入植物细胞内， 从而获得的转基因植物就能耐受高浓度的草甘膦。
下图A-F表示6株植物，其中，植物A和D对草甘膦敏感，B和E对草甘膦天然具有抗性，C和F则经过了转基因处理，但是是否成功还未知。图1和2分别表示两段DNA序列。表格中1-4分别表示4种限制性核酸内切酶的酶切位点。据图回答下列问题：
（1）若A-C浇清水，D-F浇的水中含有草甘膦，上述植物中，肯定能健康成长的是_________。
（2）若要从大肠杆菌中筛选出含EPSPS基因的突变菌株甲，在大肠杆菌培养基中还必须加入 ___________。
（3）假设位于EPSPS基因两侧的DNA序列均如图1所示，则应选择表中酶__________进行酶切；若位于EPSPS基因两侧的DNA序列分别如图1和2所示，则应选择表中酶__________ 进行酶切。
（4）假设大肠杆菌突变菌株甲中EPSPS基因的右侧序列如图2所示，请在方框内画出经酶切后产生的两个末端的碱基序列。（2分）
（5）假设EPSPS基因已被成功转移到植物F中，但植物F仍没有表现出抗性，分析可能的原因_____________。
下图甲是某目的基因（4.0kb，1kb=1000对碱基）与大肠杆菌pUC18质粒（2.7kb）重组的示意图。图中Ap′是抗氨苄青霉素基因，lacZ是显色基因，其上的EcoRI识别位点位于目的基因插入位点的右侧，其控制合成的物质能使菌落呈现蓝色。（图乙中深色圆点即为蓝色菌落）
（6）图乙的培养基中含有氨苄青霉素，请判断图乙中所出现的白色和蓝色两种菌落中，何种会含有重组质粒。___________。
（7）现用EcoRI酶切质粒，酶切后进行电泳观察，若出现长度为_________kb和 kb的片段，则可以判断该质粒已与目的基因重组成功。（重组质粒上目的基因的插入位点与EcoRI的识别位点之间的碱基对忽略不计）
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科目：高中生物 来源：河北省2009—2010学年度第二学期期中考试高二生物试卷 题型：综合题
回答下列关于基因工程的问题：
如图是将人的生长激素基因导入细菌B细胞内制造“工程菌”示意图，所用载体为质粒A。已知细菌B细胞内不含质粒A，也不含质粒A上的基因，质粒A导入细菌B后，其上的基因能得到表达，根据图示所给信息回答下列问题：
(1)将目的基因和质粒结合形成重组质粒时，用同一种限制性内切酶分别切割目的基因和质粒，露出相同的黏性末端，将切下的目的基因片段插入质粒的切口处再加入适量的 ，使质粒与目的基因结合成重组质粒。
(2)目前把重组质粒导入细菌细胞时，效率还不高；导入完成后得到的细菌，实际上有的根本没有导入质粒；有的导入的是普通质粒A；只有少数导入的是重组质粒。此处可以通过如下步骤来鉴别得到的细菌是否导入了质粒A或重组质粒：
将得到的细菌涂抹在一个含有 的培养基上，能够生长的就是导入质粒A或重组质粒的，反之则没有。此过程中体现了质粒作为运载体必须具备的两个条件 ； 。
(3)若进一步鉴定证明细菌中导入的是普通质粒A还是重组质粒，将得到的细菌涂抹在一个含有
的培养基上培养，若细菌 ，则导入的是普通质粒。如果利用DNA分子杂交原理来证明此过程，应该用 作为探针。
（4）使体外重组的DNA分子转移到受体细胞内，主要是借鉴 的途径。
(5) 目的基因表达成功后，“工程菌”明显不同于细菌D。从变异的来源看，此变异属于
。导入细菌B细胞中的目的基因成功表达的标志是什么? 。
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