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【题目】将动物致病菌的抗原基因导入马铃薯制成植物疫苗,饲喂转基因马铃薯可使动物获得免疫力.以下是与植物疫苗制备过程相关的图和表.

表1 引物对序列表

引物对A

P1 AACTGAAATGTAGCTATC

P2 TTAAGTCCATTACTCTAG

引物对B

S1 GTCCGACTAGTGGCTGTG

S2 AGCTGGCGTTTAGCCTCG

表2 几种限制酶识别序列及切割位点表

限制酶

AluⅠ

EcoRⅠ

PstⅠ

SmaⅠ

切割位点

AG↓CT

TC↑GA

G↓AATTC

CTTAA↑G

CTGCA↓G

G↑ACGTC

CCC↓GGG

GGG↑CCC

请根据以上图表回答下列问题.

(1)在采用常规PCR方法扩增目的基因的过程中,使用的DNA聚合酶不同于一般生物体内的DNA聚合酶,其最主要的特点是

(2)PCR过程中退火(复性)温度必须根据引物的碱基数量和种类来设定.表1为根据模板设计的两对引物序列,图2为引物对与模板结合示意图.请判断哪一对引物可采用较高的退火温度?

(3)图1步骤③所用的DNA连接酶对所连接的DNA两端碱基序列是否有专一性要求?

(4)为将外源基因转入马铃薯,图1步骤⑥转基因所用的细菌B通常为

(5)对符合设计要求的重组质粒T进行酶切.假设所用的酶均可将识别位点完全切开,请根据图1中标示的酶切位点和表2所列的识别序列,对以下酶切结果作出判断.

①采用EcoRⅠ和PstⅠ酶切,得到 种DNA片段.

②采用EcoRⅠ和SmaⅠ酶切得到 种DNA片段.

【答案】(1)耐高温

(2)引物对B

(3)否

(4)农杆菌

(5)①1 ②2

【解析】

试题分析:(1)PCR方法扩增目的基因的过程中,需要进行高温解链过程,因此使用的DNA聚合酶要具有耐高温的特性.

(2)耐高温的DNA分子中通常含有G与C碱基比例大,因为它们之间形成三个氢键,稳定性强.引物B中含C与G的碱基对较多,可采用较高的退火温度.

(3)多种限制酶切割,形成不同的切割位点,所用的DNA连接酶对所连接的DNA两端碱基序列就没有专一性要求.

(4)植物基因工程中,将目的基因导入受体细胞常用农杆菌转化法,因此常用农杆菌做受体细胞.

(5)据图分析,用到了EcoR I酶和Alu I酶切割抗原DNA片段产生了X、Y两个片段,而用EcoR I酶和SmaI酶切割质粒产生了 M、N两个片段,且M、N片段间存在Pst I酶切点.因此再用EcoRⅠ和PstⅠ酶切割这两片段形成的重组质粒,由于保留了Pstl的切割位点,所以可以得到两种DNA分子,而用EcoRⅠ和SmaⅠ酶切重组质粒中,如图I﹣②过程只能产生一种DNA片断.

故答案为:(1)耐高温

(2)引物对B

(3)否

(4)农杆菌

(5)①1 ②2

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