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【题目】融合PCR技术是采用具有互补末端的引物,将不同来源的扩增片段连接起来的方法,其过程如下图1所示。下图2是中间载体1和中间载体2(利用融合PCR技术构建成)构建成叶绿体定点整合表达载体示意图(限制酶酶切位点标注于载体外侧),叶绿体定点整合表达载体通过与叶绿体基因的同源重组,将目的基因整合于叶绿体DNA上的特定位点上。请据图回答下列问题。

(1)图1第一阶段中PCR至少进行____________次循环,才能获得双链等长的DNA,第二阶段中引物2与引物3部分碱基的____________关系使得两DNA能成功“搭桥”连接起来。

(2)若通过融合PCR技术将启动子、标记基因、目的基因、终止子拼接起来,需要设计__________种引物,其中能够起着“搭桥”作用的引物有__________种。

(3)图2中需使用_________________(填限制酶)和DNA连接酶将两中间载体构建成定点整合表达载体,途中定点整合表达载体上未标出的结构是__________

(4)叶绿体定点整合表达载体中____________(填基因)能使目的基因准确插入叶绿体DNA上的特定位点上。与利用农杆菌转化法相比,利用定点整合表达载体将目的基因导入叶绿体中的优点是_______

【答案】 2 互补配对 8 6 Spe I、Sal I 复制原点 叶绿体同源重组基因1和叶绿体同源重组基因2 能实现定点整合到叶绿体中,且不易随花粉扩散带来安全问题

【解析】试题分析:熟记并理解基因工程的基本操作程序,特别是利用PCR技术扩增目的基因的过程等相关的基础知识,形成清晰的知识网络。在此基础上结合题意并从题图中提取信息进行相关问题的作答。

(1)分析图1可知:在第一阶段中,利用PCR技术进行第一次扩增(循环),得到的含有引物2、引物3的产物,其DNA双链等长,该产物继续进行第二次扩增(循环),才能获得双链等长的DNA第二阶段中引物2与引物3部分碱基的互补配对关系使得两DNA能成功搭桥连接起来。

(2)1显示:通过融合PCR技术,每一次将两个DNA片段拼接起来,需要4个引物,其中有2起着搭桥作用。依此类推,若通过融合PCR技术将启动子、标记基因、目的基因、终止子拼接起来,需要设计8种引物,其中能够起着搭桥作用的引物有6种。

(3)2显示:启动子和终止子的两端分别有Spe ISal I的识别位点,叶绿体同源重组基因12之间也存在Spe ISal I的识别位点,因此2中需使用Spe ISal IDNA连接酶将两中间载体构建成定点整合表达载体,中定点整合表达载体上未标出的结构是复制原点

(4)综上分析:在叶绿体定点整合表达载体中叶绿体同源重组基因1和叶绿体同源重组基因2能使目的基因准确插入叶绿体DNA上的特定位点上。与利用农杆菌转化法相比,利用定点整合表达载体将目的基因导入叶绿体中的优点是能实现定点整合到叶绿体中,且不易随花粉扩散带来安全问题

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(2)研究发现,在情绪压力长期得不到释放的情况下,激素c能抑制T细胞合成和释放_____________,从而使B淋巴细胞的增殖分化过程受阻,最终造成人体免疫力下降。

(3)下丘脑对激素c分泌的调节与对甲状腺激素分泌的分级调节类似,由此推断当激素a的分泌量上升会使激素c的分泌量___________(填“升高”、“降低”、“不变”)。但健康人体内激素c浓度不会持续升高,其原因是_____________________________________________

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