Question

库尔勒香梨果实中存在游离态和结合态两大类呈香物质。结合态呈香物质大部分以糖苷形式存在，本身没有香气，但在β-D-葡萄糖苷酶的作用下能分解释放出具有挥发性的游离态呈香物质。若香梨在贮藏期间上述转变过程迅速，会导致部分香气成分丧失，影响果实的风味和品质。科研人员进行了相关实验（实验结果如下图所示），请分析回答：

（1）本实验的目的是　　　　　　　　 。

（2）本实验中，检测的原理如下：

① 对硝基苯-β-D-葡萄糖苷(pNPG)与香梨中的　　　　　　 分子结构相似，能在β-D-葡萄糖苷酶作用下生成对硝基苯酚，对硝基苯酚在碱性条件下显黄色。

②由于不同香梨中的　　　　　 不同，以上反应完成后，在碱性条件下呈现的黄色深浅不同，在对硝基苯酚的最佳吸收波长处测定的吸光值也不同。与事先配制好的对硝基苯酚标准溶液的　　　　　 进行比较，确定　　　　 含量，然后推算出　　　　　 。

（3）实验步骤

提取样液：定期称取不同贮藏条件下的香梨10.0 g，立即在液氮下研磨成粉末，加入经适量预冷的pH 6.0缓冲液，在冰浴下研磨成匀浆，于4℃条件下离心获得的上清液即为β-D-葡萄糖苷酶粗提取液，用pH 6.0缓冲液定容至10mL，置于4℃条件下保存备用。

检测样液：在10mL试管中依次加入0.6mL缓冲液，1.0 mL酶粗提取液和0.2 mL

10 mmol/L pNPG混合均匀，迅速盖上试管塞后立即放到37℃条件下反应60min后，加入Na₂CO₃终止反应，然后在对硝基苯酚的最佳吸收波长处测定其吸光值。

① 提取样液过程必须在低温条件下进行的原因是　　　　　　 。

② 检测样液时，酶促反应需控制在pH 6.0，37℃条件下完成，其最可能的原因是　　　　 。

（4）实验结论：

在四种不同条件下贮藏的香梨中游离态呈香物质均在贮藏　　　　　 天时相对较多，在　　　　　　 贮藏时，香梨的风味和品质最佳。

Answer 1

（1）研究不同贮存条件下β-D-葡萄糖苷酶含量（β-D-葡萄糖苷酶活性）的变化规律或探究不同贮存条件对β-D-葡萄糖苷酶含量（β-D-葡萄糖苷酶活性）的影响

（2）①结合态的呈香物质

     ②β-D-葡萄糖苷酶的含量           颜色（或吸光值）  对硝基苯酚  

       β-D-葡萄糖苷酶的含量（β-D-葡萄糖苷酶的活性）（每空1分，共4分）

（3）①保持β-D-葡萄糖苷酶含量（抑制β-D-葡萄糖苷酶失活、排除温度对酶活性的影响）     

      

②此条件下酶的活性最高（pH 6.0是β-D-葡萄糖苷酶的最适pH，37℃是β-D-葡萄糖苷酶的最适温度）

（4）4        1%涂膜（每空2分，共4分）