研究人员利用基因工程技术对肺癌的治疗进行了大量研究,肺部细胞中的let-7基因表达减弱,癌基因RAS表达增强,会引发肺癌.研究人员利用基因工程技术将let-7基因导入肺癌细胞实现表达,发现肺癌细胞的增殖受到抑制.该基因工程技术基本流程如图所示,据图回答.
(1)在基因工程中通常选择细菌质粒作为载体,原因是
;如果某质粒由1000个脱氧核苷酸组成,脱氧核苷酸平均分子量为a,则该质粒的质量为
.
(2)图甲中在构建重组载体时,酶切目的基因和酶切质粒时,所用的限制酶可以不同,但是产生的粘性末端必须是
.
(3)图甲中在将酶切后的目的基因导入到酶切后的质粒上时需要的酶是
,图乙中let-7基因转录过程需要的酶是
,这两种酶作用的化学键都是
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(4)EcoR I限制酶只能识别序列一GAATTC一,并只能在G与A之间切割.若在某目的基因的两侧各有1个EcoR I的切点,请画出目的基因两侧被限制酶EcoR I切割后所形成的黏性末端.
(5)原代培养是指直接从机体取下细胞、组织和器官后立即进行培养.原代培养随着培养时间的延长和细胞不断分裂,空间因素和营养因素会限制其进一步生长.此时就需要将培养物分割成小的部分(组织细胞分散开),重新接种到另外的培养器皿内再进行培养,这个过程就称为传代或者再培养.图甲中进行传代培养操作时,需要用
酶处理贴附在原代培养培养皿壁上的细胞,以利于传代培养.
(6)研究发现,let-7基因能影响RAS基因的表达,其影响机理如图乙所示.从分子水平的角度分析,其作用机理是
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(7)如图所示pBR322是目前常用的人工质粒载体.如果将BamHI处理后的pBR322质粒与用BgIⅡ处理得到的目的基因进行重组,并将重组质粒导入原本无amp
R和tet
R的大肠杆菌进行培养.为了检测重组质粒是否成功导入大肠杆菌,现将上述大肠杆菌在含氨苄青霉素的培养基上培养,得到如图二的菌落.再将灭菌绒布按到培养基上,使绒布面沾上菌落,然后将绒布按到含四环素的培养基上培养,得到如图三的结果(空圈表示与图二对照无菌落的位置).与图三空圈相对应的图二中的菌落表现型是
,图三结果显示,多数大肠杆菌内导入的是
.