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    9．如图是培育表达人乳铁蛋白的乳腺生物反应器的技术路线．图1中分别表示：tetR为四环素抗性基因，ampR为氨苄青霉素抗性基因，以及BamHⅠ、HindⅢ、SmaⅠ三种限制酶的酶切位点．据图回答：

    （1）图1中将人乳铁蛋白基因插入载体，需用HindⅢ和BamHⅠ限制酶同时酶切载体和人乳铁蛋白基因．能使人乳铁蛋白基因在乳腺细胞中特异性表达的调控序列是启动子．过程①可采用的操作方法是显微注射技术．为检测人乳铁蛋白是否成功表达，可采用抗原-抗体杂交技术．
    （2）过程②采用的生物技术是胚胎移植技术．在此之前，需要对代孕牛经过同期发情处理后，使之与供体的生理状况保持相同．如果对胚胎进行性别鉴定，可选用囊胚期的滋养层细胞进行鉴定．
    （3）用PCR技术扩增目的基因，其原理与细胞内DNA复制类似（如图2所示）．图中引物为单链DNA片段，它是子链合成延伸的基础．
    ①PCR技术扩增目的基因时从理论上推测，第四轮循环产物中含有引物A的DNA片段所占的比例为$\frac{15}{16}$．
    ②在第三轮循环产物中开始出现两条脱氧核苷酸链等长的DNA片段．

    分析 1、分析题图：图示是培育表达人乳铁蛋白的乳腺生物反应器的技术路线，包括基因表达载体的构建、将目的基因导入受体细胞、早期胚胎培养、胚胎移植等步骤，其中过程①是将重组质粒导入受体细胞；过程②需采用胚胎移植技术．
    2、采用PCR技术扩增DNA的过程为：变性、退火、延伸．根据PCR过程的特点绘制PCR过程示意图如图所示：

    解答 解：（1）外源DNA分子上含有限制酶BamHI、HindIII、SmaI的切割位点，其中限制酶SmaI的切割位点位于目的基因上，所以获取目的基因和构建基因表达载体时，应用限制酶HindⅢ和BamHⅠ．启动子是能使人乳铁蛋白基因在乳腺细胞中特异性表达的调控序列．过程①是将重组质粒导入受体细胞，当受体细胞是动物细胞时，将目的基因导入动物细胞最有效的方法是显微注射法．为检测目的基因是否成功表达，可采用抗原-抗体杂交技术．
    （2）过程②需要采用胚胎移植技术；胚胎移植前需要用相关激素对受体进行同期发情处理，使之与供体的生理状况保持相同；鉴定性别时，可取囊胚的滋养层细胞进行性别鉴定．
    （3）①由图可知，由原来的每条母链为模板合成的两个新DNA分子中，只含有引物A或引物B，而以新合成的子链为模板合成新DNA分子时，两种引物都含有，故第四轮循环共产生16个DNA分子，其中含有引物A的分子是15个，占$\frac{15}{16}$．
    ②由图示可知，第一、二轮循环合成的子链长度均不同，根据半保留复制特点可知，前两轮循环产生的四个DNA分子的两条链均不等长，第三轮循环产生的DNA分子存在等长的两条核苷酸链，如分析中的图示．
    故答案为：
    （1）HindⅢ和BamHⅠ启动子         显微注射技术      抗原-抗体杂交
    （2）胚胎移植技术     同期发情       滋养层  
    （3）①$\frac{15}{16}$    ②三

    点评 本题结合乳腺生物反应器培育过程图和曲线图，考查基因工程、胚胎工程和PCR技术等知识，要求考生识记基因工程的工具和操作步骤，能准确判断图中各过程的名称或采用的技术；识记胚胎分割技术的理论基础；识记PCR技术的过程、条件等，能结合所学的知识准确答题．

    练习册系列答案
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