Question

【题目】下图为将人的生长激素基因导入细菌B细胞内制“工程菌“的示意图。已知细菌B细胞内不含质粒A，也不含质粒A上的基因。请完成下列题目：

（1）图中从质粒A到重组质粒，需要的工具酶有________________、__________________。

（2）图中目的基因为_________________，为方便后续能表达出正确的产物，该目的基因的方法最好通过________________（从基因组文库中、PCR扩增、反转录法）获取。

（3）将完成导入过程的细菌涂布在含有______________的培养基上，目的是__________。

（4）若某细菌在含有四环素和氨苄青霉素的培养基上存活，则可能原因为_____________。（不考虑突变，答出一点即可）

Answer 1

【答案】限制酶 DNA连接酶 （人的）生长激素基因 反转录法 氨苄青霉素 筛选出含有重组质粒（或目的基因）的大肠杆菌 导入的DNA为未连接目的基因的质粒 / 导入的DNA为自身环化的质粒

【解析】

分析题图：图示表示将人的生长激素基因导入细菌B细胞内制造“工程菌”的过程。质粒A上含有四环素抗性基因和氨苄青霉素抗性基因，构建基因表达载体后，破环了质粒A的四环素抗性基因，但氨苄青霉素抗性基因正常，所以导入重组质粒或普通质粒的大肠杆菌都能抗氨苄青霉素，但导入重组质粒的大肠杆菌不能抗四环素。

（1）图中从质粒A到重组质粒，需要对目的基因的切割和连接在质粒中，所以需要的工具酶有限制酶和DNA连接酶。

（2）图中目的基因为人的生长激素基因，为方便后续能表达出正确的产物，获取该目的基因的方法最好通过反转录法，因为反转录的目的基因不含内含子，能在原核细胞内得以正确表达。

（3）结合前面的分析可知，将完成了导入过程的细菌涂布在含有氨苄青霉素的培养基上，目的是为了淘汰没有导入质粒的细菌，从而筛选出含有重组质粒（或目的基因）的大肠杆菌。

（4）若某细菌在含有四环素和氨苄青霉素的培养基上存活，则说明导入细菌内的质粒中完整的四环素抗性基因和氨苄青霉素抗性基因，可能的原因是导入的DNA为未连接目的基因的质粒或导入的DNA为自身环化的质粒。