Question

【题目】下图是某同学分离和培养洗衣机中微生物的部分操作步骤和实验结果示意图。

（1）图1所示操作为倒平板，此时培养基温度约为______℃，若用该培养基培养洗衣机中滋生的细菌时，除考虑各种营养条件外，还要考虑______和渗透压等条件(至少写两个)。

（2）图2所示接种方法是______，从图示信息看，操作中存在错误的步骤是______(用字母表示)。操作过程中，接种环需要灼烧灭菌的次数是______次。

（3）将以上接种后的平板置于培养箱中培养时，需倒置的原因是______。

（4）在检测洗衣机的污垢中是否含微生物时，也有同学先将污垢制成一定浓度的水样溶液，然后用移液枪取0.1 mL菌液滴入平板，并用涂布器涂布到固体培养基的表面进行培养，这种接种方法称为______。培养一段时间后，该同学统计发现培养皿中共有57个菌落(如图3)，他认为0.1 mL菌液中含有的细菌实际数很可能大于57个，其依据是______。

（5）实验结束后，使用过的培养基应该进行灭菌处理才能倒掉，此目的是______。

Answer 1

【答案】50温度、pH、氧气、无菌等平板划线法C6防止皿盖上凝结的水珠落入培养皿造成污染稀释涂布平板法叠在一起的两个或多个细菌形成了一个菌落防止造成环境污染

【解析】

平板划线操作：①将接种环放在火焰上灼烧，直到接种环烧红；②在火焰旁冷却接种环，并打开棉塞；③将试管口通过火焰；④将己冷却的接种环伸入菌液中，沾取一环菌液；⑤将试管口通过火馅，并塞上棉塞；⑥左手将皿盖打开一条缝隙，右手将沾有菌种的接种环迅速伸入平板内，划三至五条平行线，盖上皿盖。注意不要划破培养基；⑦灼烧接种环，待其冷却后，从第一区域划线的末端开始往第二区域内划线。重复以上操作，在三、四、五区域内划线。注意不要将最后一区的划线与第一区相连。

涂布平板操作：①将涂布器浸在盛有酒精的烧杯中；②取少量菌液（不超过0.1mL），滴加到培养基表面；③将沾有少量酒精的涂布器在火焰上引燃，待酒精燃尽后，冷却8~10s；④用涂布器将菌液均匀地涂布在培养基表面。涂布时可转动培养皿，使菌液分布均匀。

（1）培养基温度为50℃，倒平板比较合适。温度过低时，琼脂容易凝固，不利倒平板；温度过高时倒平板，会在培养基表面形成大量冷凝水，影响使用。细菌生长繁殖的条件有：①充足的营养；②适宜的温度；③合适的酸碱度；④必要的气体环境；⑤无菌的条件；⑥适宜的渗透压等。

（2）图2所示是平板划线接种操作示意图，操作顺序是A→B→E→D→C→F。其中操作错误的步骤是C，该步骤应在酒精灯火焰旁操作。平板划线法中有以下几种情况需要对接种环进行灼烧灭菌。①取菌种前灼烧接种环是为了杀死接种环上原有微生物。②从第二次开始，每次划线前灼烧接种环是为了杀死上次划线后接种环上残留菌种，使下次划线的菌种直接来自于上次划线末端，使每次划线菌种数目减少，达到分离菌株的目的。③接种结束后灼烧接种环是为了杀死接种环上残存的菌种，避免细菌污染环境和感染操作者。由图2可知，共在平板划线5次，因此接种环需要灼烧灭菌6次。

（3）为了防止皿盖上凝结的水珠落入培养基造成污染，因此将以上接种后的平板置于培养箱中培养时需倒置。

（4）同学先将污垢制成一定浓度的水样溶液，然后用移液枪取0.1 mL菌液滴入平板，并用涂布器涂布到固体培养基的表面进行培养，这种方法称为稀释涂布平板法。当两个或多个细菌连在一起，平板上只观察到一个菌落。因此，0.1 mL菌液中含有的细菌实际数很可能大于57个。

（5）实验结束后，为了避免细菌污染环境，使用过的培养基应该进行灭菌处理才能倒掉。