Question

补充正常凝血因子F8可以治疗甲型血友病，因此可以利用转基因技术人工生产F8。某种大肠杆菌的质粒中含有β-半乳糖苷酶α片段序列，大肠杆菌的DNA分子中则含有β-半乳糖酶ω片段序列，由于天然大肠杆菌同时具备这两种片段序列，可以使培养基中含有X-gal底物转变成蓝色产物，当缺少任意一个α或ω片段序列，X-gal底物不能转变成蓝色产物。HindⅢ、 EcoRI、BamHI分别为三种限制性内切酶，下图中箭头所指为三种限制酶的切点。

（1）应选用的限制性内切酶是                 ，选择的依据是                        
（2）限制酶作用的化学键是         。
（3）控制F8的基因也可以通过人体细胞相应的mRNA来合成，该合成的过程称为           。将经转基因技术处理过的质粒导入大肠杆菌后，再将大肠杆菌接种到含有X-gal底物的培养基培养一段时间后，培养基中出现较多的蓝色菌落，这是因为                                              。

Answer 1

（1） EcoRI  切断α片段序列，为重组DNA分子的筛选提供标记（2分）
（2）磷酸二酯键
（3）逆（反）转录   同一种限制酶作用的目的基因、质粒具有相同的粘性末端，因此会出现质粒的自我环化的空载现象，空载质粒含有完整的α、ω片段序列，能利用培养基中的X-gal底物产生蓝色产物（2分）

解析试题分析：⑴由题意可知，当大肠杆菌缺少任意一个α或ω片段序列，X-gal底物不能转变成蓝色产物，故可破坏质粒中的α片段序列，不能选择HindⅢ，是因为HindⅢ的切割位点在F8基因内，破坏了目的基因的完整，将来就无法合成正常凝血因子F8，所以选用EcoRI。⑵限制酶作用于DNA分子的磷酸二酯键，使DNA分子断裂。⑶通过mRNA来合成基因的过程称为逆转录；由于用同一种限制酶作用的目的基因、质粒具有相同的黏性末端，因此会出现质粒的自我环化的空载现象，空载质粒含有完整的α、ω片段序列，能利用培养基中的X-gal底物产生蓝色产物。
考点：本题主要考查与基因工程相关的知识，意在考查考生能理解所学知识的要点，把握知识间的内在联系，形成知识网络结构的能力。