Question

【题目】回答下列“蛋白质提取与分离实验”的有关问题：

（1）为了提取和分离血红蛋白，首先对红细胞进行洗涤以去除杂质蛋白，洗涤时应使用生理盐水而不使用蒸馏水的原因是___________。

（2）血红蛋白粗分离阶段，采用图1的透析装置，透析的目的是___________，透析液选用的是___________，一段时间后，若向烧杯中加入双缩脲试剂，透析袋内溶液是否出现紫色并说明判断的依据：___________。

（3）图2是利用电泳法分离蛋白质的结果，电泳利用了待分离样品中各种分子的___________等的差异，而产生不同迁移速度，实现各种分子的分离。

（4）图3是用于分离蛋白质的凝胶色谱柱，装填凝胶色谱柱时，若发现有气泡，则需___________。a、b均为蛋白质分子，其中先从凝胶色谱柱中洗脱出来的是a，是因为a蛋白质分子___________。

Answer 1

【答案】防止红细胞吸水涨破（或维持细胞形态） 除去小分子杂质 磷酸缓冲液 是（或出现紫色），双缩脲试剂可以透过半透膜，与袋内可溶性蛋白反应，生成紫色物质 带电性质以及分子大小、形状 重新装填 相对分子质量大，无法进人凝胶内部的通道，只能在凝胶外部移动，路程较短，移动速度较快

【解析】

血红蛋白提取和分离的程序可分为四大步，包括：样品处理、粗分离、纯化和纯度鉴定。首先通过洗涤红细胞、血红蛋白的释放、离心等操作收集到血红蛋白溶液，即样品的处理；再经过透析去除分子量较小的杂质，即样品的粗分离；然后通过凝胶色谱法将相对分子质量大的杂质蛋白除去，即样品的纯化；最后经聚丙烯酰胺凝胶电泳进行纯度鉴定。

（1）提取和分离血红蛋白的操作中，红细胞的洗涤需要用生理盐水，生理盐水是红细胞的等渗溶液，红细胞不会变形，如果用蒸馏水红细胞会通过渗透作用吸水涨破。

（2）除去小分子杂质的方法是透析，小分子物质可以透过透性袋进入烧杯而大分子血红蛋白保留在透性袋内，透析液是（磷酸）缓冲液；由于透性袋是半透膜，双缩脲试剂可以透过半透膜，与袋内血红蛋白质反应，生成紫色物质，因此袋内会出现紫色。

（3）由于各种分子带电性质以及分子大小、形状等的差异，在电泳过程中会产生不同的迁移速度，从而实现各种分子的分离。

（4）装填色谱柱时，如果有气泡，需要重新装填；凝胶色谱法是根据相对分子质量大小分离蛋白质的有效方法，相对分子质量较小的蛋白质容易进入凝胶内部的通道，路程长，移动的速度慢，而a蛋白分子相对分子质量较大的蛋白质不容易进入凝胶内部的通道，路程短，移动的速度快，先洗脱出来。