Question

【题目】回答下列(一)(二)小题：

(一)请回答从土壤中分离产脲酶细菌和脲酶固定化实验的有关问题：

(1)LB固体培养基：取适量的蛋白胨、酵母提取物、NaCl，加入一定量的蒸馏水溶解，再加________，灭菌备用。

(2)尿素固体培养基：先将适宜浓度的尿素溶液用______灭菌过的G6玻璃砂漏斗过滤，因为G6玻璃砂漏斗__________________，故用于过滤细菌。然后将尿素溶液加入到已经灭菌的含有酚红的培养基中，备用。

(3)取适量含产脲酶细菌的10－4、10－5两种土壤稀释液，分别涂布接种到LB固体培养基和尿素固体培养基上，培养48 h，推测固体培养基上生长的菌落数最少的是____(A.10－5稀释液＋尿素固体培养基　B．10－5稀释液＋LB固体培养基　C．10－4稀释液＋尿素固体培养基　D．10－4稀释液＋LB固体培养基)。

在尿素固体培养基上产脲酶细菌菌落周围出现______，其原因是细菌产生的脲酶催化尿素分解产生______所致。

(4)制备固定化脲酶时，用石英砂吸附脲酶，装柱。再用蒸馏水洗涤固定化酶柱，其作用是________________________________________________________________________。

(二)某小组欲进行烟草原生质体分离与培养的研究。请回答：

(1)原生质体的分离：在无菌条件下，取烟草无菌苗的叶片，放入含有0.5 mol/L甘露醇(维持较高渗透压)的________混合液处理，经过离心纯化后获得原生质体。

(2)原生质体的培养：将原生质体进行培养，重新长出细胞壁，形成胚性细胞。此时，应该________培养基中甘露醇浓度，以利于胚性细胞继续培养形成细胞团，然后经两条途径形成再生植株。途径一：细胞团经球形胚、______和胚状体，最后发育成植株。途径二：细胞团增殖为愈伤组织，然后在发芽培养基上诱导出芽，切割芽经过生根后形成完整植株。上述发芽培养基中含量相对较高的激素是________，胚性细胞的主要特点是：________(A.液泡小、细胞核小　B．液泡大，细胞核大　C．液泡大，细胞核小　D．液泡小、细胞核大)。

(3)为了对烟草的某些性状进行改良，分离得到两种烟草的原生质体后，通过________________方法将它们的遗传物质组合在一起，经培养获得具有新性状的再生植株。提取再生植株的DNA，采用______________扩增相关基因，来鉴定遗传物质是否成功重组。

Answer 1

【答案】 琼脂(糖) 高压蒸汽 孔径小，细菌不能滤过 A 红色环 氨(或NH3) 除去游离的脲酶 果胶酶、纤维素酶 降低 心形胚 细胞分裂素 D 原生质体融合 PCR方法

【解析】试题分析：本题考查微生物的分离、酶的固定化、原生质体的分离与培养，考查对产脲酶细菌分离、酶固定化、原生质体制备与培养原理与操作流程的理解与识记。

(一) (1)制备固体培养基需入加琼脂(糖)。

(2)玻璃容器可采用高压蒸汽法灭菌。G6玻璃砂漏斗孔径小，细菌不能滤过，故用于过滤细菌。

(3)土壤稀释液的稀释倍数越大，培养基中菌落数越少；尿素固体培养基上仅产脲酶细菌可大量繁殖，其他细菌不能繁殖，故10－5稀释液＋尿素固体培养基上菌落数最少。在尿素固体培养基上产脲酶细菌产生的脲酶催化尿素分解产生氨(或NH3)，使pH升高，酚红试剂变红，使菌落周围出现红色环。

(4)用蒸馏水洗涤固定化酶柱，目的是除去游离的脲酶。

(二) (1)细胞壁的成分为纤维素和果胶，利用酶的专一性，用果胶酶、纤维素酶混合液处理，可除去细胞壁，获得原生质体。

(2)将原生质体培养形成胚性细胞后，应该降低培养基中甘露醇浓度，以利于胚性细胞继续培养形成细胞团。细胞团可以经球形胚、心形胚和胚状体，最后发育成植株。发芽培养基中细胞分裂素含量相对较高；胚性细胞液泡小、细胞核大。

(3)得到两种烟草的原生质体后，可通过原生质体融合方法将它们的遗传物质组合在一起。扩增相关基因可采用PCR方法。