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16.GDNF是一种神经营养因子.对损伤的神经细胞具有营养和保护作用.研究人员构建了含GDNF基因的表达载体(如图所示),并导入到大鼠神经干细胞中,用于干细胞基因治疗的研究.请回答:

(1)完成图中A过程必需的工具是限制酶和DNA连接酶;该基因治疗的受体细胞为神经干细胞.
(2)基因工程最核心的步骤是构建基因表达载体.
(3)若要构建含GDNF基因的表达载体,则需选择图中的XhoⅠ限制酶进行酶切.
(4)限制酶XhoI和限制酶HpaI的识别序列及切割位点分别是-C↓AATTG-和-G↓AATTC-.如下图表示四种质粒,其中,箭头所指部位为酶的识别位点,质粒的阴影部分表示标记基因.适于作为图示GDNF基因运载体的是A.

(5)下列有关限制性核酸内切酶和质粒运载体的描述,正确的是C.
A.限制性核酸内切酶能识别DNA、切割DNA任一序列
B.限制性核酸内切酶的作用部位与RNA聚合酶的相同
C.使用质粒运载体是为了避免目的基因被分解
D.质粒运载体可能是从细菌或者病毒的DNA改造的
(6)经酶切后的载体和GDNF基因进行连接,连接产物经筛选得到的载体主要有三种:单个载体自连、GDNF基因与载体正向连接、GDNF基因与载体反向连接(如图所示).为鉴定这3种连接方式,选择HpaI酶和BamHI酶对筛选的载体进行双酶切,若是正向连接的重组载体,其产生的酶切片段数为2个,反向连接的重组载体产生片段有②⑥(多选).
①100bp  ②200bp  ③600bp   ④700bp  ⑤6000bp  ⑥6500bp.

分析 基因工程技术的基本步骤:
(1)目的基因的获取:方法有从基因文库中获取、利用PCR技术扩增和人工合成.
(2)基因表达载体的构建:是基因工程的核心步骤,基因表达载体包括目的基因、启动子、终止子和标记基因等.
(3)将目的基因导入受体细胞:根据受体细胞不同,导入的方法也不一样.将目的基因导入植物细胞的方法有农杆菌转化法、基因枪法和花粉管通道法;将目的基因导入动物细胞最有效的方法是显微注射法;将目的基因导入微生物细胞的方法是感受态细胞法.
(4)目的基因的检测与鉴定:分子水平上的检测:①检测转基因生物染色体的DNA是否插入目的基因--DNA分子杂交技术;②检测目的基因是否转录出了mRNA--分子杂交技术;③检测目的基因是否翻译成蛋白质--抗原-抗体杂交技术.个体水平上的鉴定:抗虫鉴定、抗病鉴定、活性鉴定等.

解答 解:(1)图中A表示基因表达载体的构建过程,该过程中需要先用限制酶切割含有目的基因的外源DNA分子和运载体,其次还需要用DNA连接酶将目的基因与运载体连接形成重组DNA分子;根据题干信息“导入到大鼠神经干细胞中”可知,该基因治疗的受体细胞为神经干细胞.
(2)基因工程的核心步骤是构建基因表达载体.
(3)质粒上有XhoⅠ识别位点,而且在启动子之后,所以要构建含GDNF基因的表达载体,应选用XhoⅠ限制酶进行酶切.
(4)A、该质粒中含有限制酶XhoI的切割位点,且切割位点不在标记基因上,可作为基因的运载体,A正确;
B、该质粒不含标记基因,不可位于基因的运载体,B错误;
C、该质粒含有标记基因和限制酶HpaI,但切割位点位于标记基因上,用该酶切割后会破坏标记基因,因此不能作为基因的运载体,C错误;
D、该质粒含有标记基因和限制酶XhoI,但切割位点位于标记基因上,用该酶切割后会破坏标记基因,因此不能作为基因的运载体,D错误.
故选:A.
(5)A.限制性核酸内切酶具有特异性,一种限制酶只能识别特点的DNA序列,并在特定的位点进行切割,A错误;
B.限制性核酸内切酶的作用是切断脱氧核苷酸之间的磷酸二酯键,而RNA聚合酶的作用是在核糖核苷酸之间形成磷酸二酯键,B错误;
C.使用质粒运载体是为了将目的基因导入受体细胞,避免目的基因被分解,C正确;
D.质粒运载体可能是由细菌的DNA改造形成的,但不是由病毒的DNA改造形成的,D错误.
故选:C.
(6)经酶切后的载体和GDNF基因进行连接,连接产物经筛选得到的载体主要有三种:单个载体自连、GDNF基因与载体正向连接、GDNF基因与载体反向连接(如图1所示).为鉴定这3种连接方式,选择HpaI酶和BamHI酶对筛选的载体进行双酶切,若属于载体自连,且产生的酶切片段只有一种;若是正向连接的重组载体,其产生的酶切片段数为2个,且长度分别与质粒和GDNF基因长度相同;若是反向连接的重组载体,经过BamHⅠ酶切后产生两种长度的片段,即200bp和6500bp.
故答案为:
(1)限制酶和DNA连接酶    神经干细胞
(2)构建基因表达载体
(3)XhoⅠ
(4)A   
(5)C  
(6)2    ②⑥

点评 本题考查基因工程的相关知识,要求考生识记基因工程的原理、操作工具及操作步骤等,掌握各步骤中的相关细节,能结合所学的知识准确答题,属于考纲理解和应用层次的考查.

练习册系列答案
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科目:高中生物 来源: 题型:选择题

6.下列有关人体免疫系统及调节的叙述,正确的是(  )
A.效应T细胞能裂解靶细胞并直接清除靶细胞中抗原
B.浆细胞与效应T细胞中的基因不同
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D.浆细胞在特异性识别抗原后,自身合成并分泌抗体来消灭抗原

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科目:高中生物 来源: 题型:解答题

7.玉米是遗传实验经常用到的材料,在自然条件下既可以自交也可以杂交.请回答下列有关问题.
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写出你的设计思路用该玉米果穗上的全部子粒作为亲本,单独隔离种植(自交),观察记录,并分别统计子代植株的高矮.
(2)玉米的常态叶与皱叶是一对相对性状.某研究性学习小组计划以自然种植多年后收获的一批常态叶与皱叶玉米的种子为材料,通过实验判断该相对性状的显隐性.
①甲同学的思路是随机选取等量常态叶与皱叶玉米种子各若干粒,分别单独隔离种植,观察子一代性状:若子一代发生性状分离,则亲本表现出的性状为显性性状;若子一代未发生性状分离,能否直接判断出显、隐性?不能.
②乙同学的思路是随机选取等量常态叶与皱叶玉米种子各若干粒,种植,杂交,观察子代性状,请帮助预测实验结果及得出相应结论.在统计数量足够多的情况下,若后代只表现一种叶形,则该叶形为显性性状,另一种为隐性性状;若后代既有常态叶又有皱叶,则不能作出显隐性判断.

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4.下列关于DNA的叙述正确的是(  )
A.复制均在细胞核内进行
B.解旋和脱氧核苷酸的逐一连接均要消耗能量
C.复制只需要解旋酶
D.DNA的复制过程中碱基A的消耗量等于碱基G的消耗量

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11.花生种子放在太阳下晒干过程中和用酒精灯灼烧过程中失去的水分别是(  )
A.自由水和结合水B.自由水和自由水C.结合水和结合水D.结合水和自由水

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1.如图是高等动物细胞,图中结构及标注的错误共有几处?(  )   
  
A.3B.4C.5D.6

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8.常见的果酒、果醋、泡菜和腐乳的制作都离不开微生物的作用,请结合微生物的特点及产品的制作过程,完成下列问题.
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(3)腌制腐乳的卤汤中应含有12%左右的酒精以抑制细菌的增殖.
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