Question

【题目】苯丙酮尿症是由P基因突变引起的，科研人员将正常P基因定点整合到P基因突变的小鼠胚胎于细胞的染色体DNA上，替换掉突变基因，治愈了老鼠的苯丙酮尿症（如图）。该技术有望在人类疾病的治疗上取得预期效果。请回答下列问题：

（1）构建含P基因的重组载体时，常用的工具酶是____；已知含neo‘的细胞具有G418（一种抗生素）的抗性，可见重组载体中的neor是 ____。

（2）常用____法将重组载体导入小鼠胚胎干细胞，将重组载体导入胚胎干细胞的原因是胚胎干细胞能大量增殖，且____。

（3）若从小鼠的早期胚胎中获取胚胎干细胞，可以从 ___中获取；要使贴壁生长的胚胎干细胞从瓶壁上脱落，可用____酶处理。

（4）利用neor等筛选出胚胎干细胞，将筛选出的胚胎干细胞培育成小鼠，还需通过检测小鼠体内 ___的含量，进行个体生物学水平的检测。

Answer 1

【答案】限制酶和DNA连接酶 标记基因 显微注射 具有发育的全能性 桑椹胚或囊胚的内细胞团 胰蛋白酶或胶原蛋白 苯丙酮酸

【解析】

基因工程技术的基本步骤：
（1）目的基因的获取：方法有从基因文库中获取、利用PCR技术扩增和人工合成。
（2）基因表达载体的构建：是基因工程的核心步骤，基因表达载体包括目的基因、启动子、终止子和标记基因等。
（3）将目的基因导入受体细胞：根据受体细胞不同，导入的方法也不一样，将目的基因导入植物细胞的方法有农杆菌转化法、基因枪法和花粉管通道法；将目的基因导入动物细胞最有效的方法是显微注射法；将目的基因导入微生物细胞的方法是感受态细胞法。
（4）目的基因的检测与鉴定：分子水平上的检测：①检测转基因生物染色体的DNA是否插入目的基因--DNA分子杂交技术；②检测目的基因是否转录出了mRNA--分子杂交技术；③检测目的基因是否翻译成蛋白质--抗原-抗体杂交技术，个体水平上的鉴定：抗虫鉴定、抗病鉴定、活性鉴定等。

（1）构建含P基因的重组载体时，常用的工具酶是限制酶和DNA连接酶；含neor的细胞具有G418的抗性，推测重组载体中的neor是标记基因，利于目的基因的检测与鉴定。

（2）将目的基因导入动物细胞，常用显微注射法。胚胎干细胞能大量增殖，且具有发育的全能性，转基因的胚胎干细胞可培育成转基因的新个体。

（3）胚胎干细胞可以从原始性腺或早期胚胎中获取，桑椹胚或囊胚的内细胞团细胞都具有发育的全能性，属于胚胎干细胞。要使贴壁生长的胚胎干细胞从瓶壁上脱落，可用胰蛋白酶或胶原蛋白酶处理。

（4）对转基因小鼠进行个体生物学水平的检测时，可以通过检测小鼠体内苯丙酮酸的含量来完成。