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    5．人的内皮抑素（一种蛋白质）能诱导血管内皮细胞凋亡，进而抑制新血管的产生．临床上通过静脉注射含有内皮抑素基因的腺病毒感染肿瘤细胞，使肿瘤细胞产生并释放内皮抑素，抑制新生血管的形成，使肿瘤细胞进入休眠状态并诱导其凋亡．
    回答下列问题：
    （1）从肝细胞中提取总mRNA，利用逆转录酶合成cDNA（或DNA），根据内皮抑素基因的核苷酸序列（或序列、碱基序列、碱基对序列或脱氧核苷酸序列）设计并合成引物，利用PCR技术得到大量内皮抑素基因．
    （2）在构建含内皮抑素基因的腺病毒并导人受体细胞的过程中，以限制酶（或限制性核酸内切酶）和DNA连接酶作为工具酶，以腺病毒作为载体．
    （3）在进入临床使用前，需用体外培养的血管内皮细胞进行生理、病理检测．为获得大量的血管内皮细胞，首先用胰蛋白（或胶原蛋白）酶处理血管内皮组织，使其分散成单个细胞，制成细胞悬液，然后将其放人含血清、血浆等一些天然成分的合成培养基中培养．
    （4）血管内皮细胞被重组腺病毒感染后，若通过抗原一抗体杂交方法检测呈阳性并观察到细胞凋亡，则说明内皮抑素基因得到表达且具有生物学活性．
    （5）临床上将含内皮抑素基因的腺病毒通过静脉注射感染肿瘤细胞，使肿瘤生长受到抑制，这种治疗方法属于体内（填“体内”或“体外”）基因治疗．

    分析 1、基因工程技术的基本步骤：
    （1）目的基因的获取：方法有从基因文库中获取、利用PCR技术扩增和人工合成．
    （2）基因表达载体的构建：是基因工程的核心步骤，基因表达载体包括目的基因、启动子、终止子和标记基因等．
    （3）将目的基因导入受体细胞：根据受体细胞不同，导入的方法也不一样．将目的基因导入植物细胞的方法有农杆菌转化法、基因枪法和花粉管通道法；将目的基因导入动物细胞最有效的方法是显微注射法；将目的基因导入微生物细胞的方法是感受态细胞法．
    （4）目的基因的检测与鉴定：分子水平上的检测：①检测转基因生物染色体的DNA是否插入目的基因--DNA分子杂交技术；②检测目的基因是否转录出了mRNA--分子杂交技术；③检测目的基因是否翻译成蛋白质--抗原-抗体杂交技术．个体水平上的鉴定：抗虫鉴定、抗病鉴定、活性鉴定等．
    2、基因治疗的种类：体外基因治疗和体内基因治疗（注意两者的区别），其中效果比较可靠的是体外基因治疗．
    体外基因治疗：先从病人体内获得某种细胞进行培养，然后再体外完成转移，再筛选成功转移的细胞增植培养，最后重新输入患者体内，如腺苷酸脱氨酶基因的转移．
    体内基因治疗：用基因工程的方法直接向人体组织细胞中转移基因的方法．

    解答 解：（1）以mRNA为模板合成DNA的过程称为逆转录过程；根据内皮抑素基因的核苷酸序列（或序列、碱基序列、碱基对序列或脱氧核苷酸序列）设计并合成引物，利用PCR技术得到大量内皮抑素基因．
    （2）构建基因表达载体时，首先需要限制酶切割外源DNA分子和运载体，其次需要DNA连接酶将目的基因与运载体连接形成重组DNA分子．根据题干信息“临床上通过静脉注射含有内皮抑素基因的腺病毒感染肿瘤细胞”可知，构建基因表达载体时以腺病毒作为载体．
    （3）动物细胞培养时，首先用胰蛋白（或胶原蛋白）酶处理血管内皮组织，使其分散成单个细胞，制成细胞悬液，然后将其放人含 血清、血浆等一些天然成分的合成培养基中培养．
    （4）检测目的基因是否表达产生相应的蛋白质，可采用抗原-抗体杂交技术．
    （5）临床上将含内皮抑素基因的腺病毒通过静脉注射感染肿瘤细胞，使肿瘤生长受到抑制，这种治疗方法属于体内基因治疗．
    故答案为：
    （1）cDNA（或DNA）　　核苷酸序列（或序列、碱基序列、碱基对序列或脱氧核苷酸序列）
    （2）限制酶（或限制性核酸内切酶）和DNA连接酶 　　腺病毒
    （3）胰蛋白（或胶原蛋白）　　血清、血浆
    （4）抗原一抗体杂交
    （5）体内

    点评 本题考查基因工程的相关知识，要求考生识记基因工程的原理、操作步骤及各操作步骤中需要注意的细节；了解基因工程技术的相关应用，能结合题中信息准确答题．

    练习册系列答案
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    18．若干只基因型为AaBb的小鼠相互交配，所产的子代小鼠的表现型及其比例为A_B_：A_bb：aaB_：aabb=66：9：9：16，假设后代中各种基因型的小鼠生存概率完全相同，下列有关分析中不正确的是（　　）
    A．后代变异小鼠出现的原因是基因重组
    B．上述每对基因的遗传都符合基因分离定律
    C．基因型为AaBb的小鼠产生4种配子的数量为AB＞ab＞Ab=aB
    D．A、a和B、b这两对基因的遗传不符合自由组合定律

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    16．盐碱化草地因其土壤中含有氯化物、硫酸盐、碳酸钠等盐分，造成草地生产能力低下，如图表示重度盐碱化草地的恢复过程．据图分析下列说法中不正确的是（　　）
    A．重度盐碱化草地恢复的过程属于次生演替
    B．人类活动的干预能加快群落演替的速度
    C．盐碱化草地恢复过程中抵抗力稳定性增强
    D．优良牧草比先锋植物更适应盐碱化草地

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    13．当阳光穿过森林中的空隙形成“光斑”，如图是一株生长旺盛的植物在“光斑”照射前后光合作用吸收CO2（实线）和释放O2（虚线）气体量的变化曲线，据图分析：

    （1）光合作用过程中释放的O2来源于水（填物质名称），伴随该物质分解时的能量变化是光能转化为ATP中活跃的化学能．
    （2）光斑照射后，虚线bc急剧下降，说明暗反应对光反应有限制作用．
    （3）第40S后，“光斑”移开，但CO2吸收速率曲线持续到第60S才下降成水平状态，是因为细胞中积累有一定量的[H]和ATP．
    （4）图中区域Ⅰ为图形abcd，区域Ⅱ为图形ade，区域Ⅲ为图形def，现已知Ⅰ+Ⅱ的面积为84，则图形Ⅱ+Ⅲ的面积为84，该面积大小可表示光斑照射下叶片细胞增加的净光合量．

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    20．下列关于生物进化的叙述，正确的是（　　）
    A．一个细胞中所含有的全部基因称为基因库
    B．有性生殖方式的出现加快了生物进化的速度
    C．地理隔离是新物种形成的必要条件
    D．在稳定的生态系统中，种群的基因频率不会发生改变

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    10．目前第二、三代病毒疫苗的研制是基于DNA重组技术而建立的．请分析回答下列问题：
    （1）第二代疫苗是以编码病毒抗原蛋白的RNA为模板，经逆转录酶酶的作用获得目的基因，再利用限制酶和DNA连接酶等工具酶构建基因表达载体．
    （2）要将重组质粒导入大肠杆菌，应先用Ca2+处理大肠杆菌，使大肠杆菌转变为感受态；再将重组质粒和感受态细胞在缓冲液中混合培养完成转化过程．
    （3）第三代疫苗即“DNA疫苗”是将编码某种抗原蛋白的DNA注射到动物体内，该DNA可在生物体内翻译（转录和翻译/表达）出相应的抗原蛋白．
    （4）对于基因工程产品安全性的争论越来越激烈，目前转基因生物的安全性主要体现在食物安全方面、生物安全方面和环境安全方面三个方面．

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    17．用X射线处理某动物细胞，其结果不可能是（　　）
    A．细胞膜上的糖蛋白会减少B．刺激细胞产生更多的自由基
    C．细胞中的蛋白质活性下降D．使正常代谢活动受损而凋亡

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    14．回答下列关于光合作用的系列问题．
    （1）如图1中④物质的中文名称是还原型辅酶II，光合作用中最终的电子供体是水．
    （2）反应①称为水的光解，产生的O2释放到空气中至少要穿过4层生物膜．
    （3）在结构⑨叶绿体基质中进行的主要生理活动是暗反应，影响反应⑤过程的细胞结构是气孔．
    在春末晴朗的白天，上海某蔬菜基地测定了某大棚蔬菜在不同条件下的净光合作用强度（实际光合作用强度与呼吸作用强度之差），结果如图2（假设塑料大棚外环境条件相同；植株大小一致、生长正常，栽培管理条件相同）
    光照强度
    （千勒克司）    		光合作用速度
    （CO2mg/100cm2叶•小时）
    1.0-2.0
    3.0+2.0
    5.0+6.0
    7.0+10.0
    8.0+12.0
    10.0+12.0
    （4）在曲线a中，与11时相比，13时植株叶绿体内C3与C5这两种化合物中相对含量较高的是C5；在11时和13时分别摘取植株上部成熟叶片用酒精脱色后用碘液处理，13时所取叶片显色较深（深或浅）．
    （5）曲线b的峰值低于曲线a，其中的主要决定因素是光照强度、空气中CO2含量、温度．曲线c高于曲线b，原因是补充光照能使叶绿体产生更多的ATP、NADPH（[H]）用于CO2还原．
    （6）6～9时和16～18时，曲线b高于曲线a，主要原因是此时段棚内温度较高．
    （7）在一定浓度的CO2和适当的温度条件下，测定某双子叶植物叶片在不同光照条件下的光合作用速度，结果如表．表中负值表示二氧化碳释放量，正值表示二氧化碳吸收量．在一天中，将该植物叶片置于10千勒克司光照下10小时，其余时间置于黑暗中，则每l00cm2叶片产生的葡萄糖中43.6mg将转化为淀粉．（取小数点后一位）

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    科目：高中生物 来源： 题型：解答题

    12．科研人员通过以下三种途径快速繁殖猪的优良品种，请依次回答下列问题：

    （1）途径①中的供体细胞应为传代10代以内的细胞，受体细胞应为去核的卵母细胞，该途径可说明动物细胞核的全能性．
    （2）途径②是把从猪输卵管中采集的卵母细胞进行物理化学联合刺激，使其激活并发育成胚胎，获得孤雌生殖克隆猪（二倍体），这些克隆猪的性别都相同（都相同、不相同），发育为孤雌克隆猪的卵母细胞应处于减数第二次分裂后期（MⅡ后期）时期．为了获得更多的卵母细胞，可对良种母猪用促性腺激素进行超数排卵处理．
    （3）途径③采用了基因工程的法，该方法的核心步骤是基因表达载体的构建，可采用DNA分子杂交方法来检测转基因猪的DNA上是否插入目的基因．

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